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信阳师范学院大学生科研项目申请书 项目类别（在相应序号上划○） 1.人文社会科学研究项目 自然科学研究项目 所属学科： 课题名称： 申请者： 所学专业： 系（院）名称： 申请日期： 200910月10日 信阳师范学院制项目名称 项目所属学科领域 研究类别 A.基础研究 B.应用研究 成果形式 、学术论文 2、著作 、调研报告 4、文艺作品 、科技制作 6、其他 申请经费总额 起止时间 至 项目主持人及成员情况 类别 姓 名 所学专业 科研特长 系（院）名称 班级 科研分工 主持人 项目组 其他 成员 基因表达与调控 生命科学学院 2007级研究生班 基因表达量检测 曾 威 植物学 基因克隆与DNA分析 生命科学学院 2009级研究生班 基因克隆 贾 晓 植物学 植物微生态学 生命科学学院 2008级研究生班 基因克隆 李向阳 生物科学 植物转基因 生命科学学院 2007级本科2班 RNA的提取与反转录 刘 颖 生物科学 植物组织培养 生命科学学院 2007级本科1班 材料管理、各种处理 指导 教师 姓 名 专业 科研方向 系（院）名称 职称 签名 冯志国 遗传学 基因工程 生命科学学院 讲师 项目主要研究内容和目标：利用RACE技术克隆茶树II型基因的全长cDNA假眼小绿叶蝉RIP基因表达的影响。 本项目的研究目标是获得II型核糖体失活蛋白基因的全长cDNA序列和基因组DNA序列，并阐明其表达调控，为利用该基因培育抗虫转基因植株创造条件。 论证报告 一、本课题研究本课题的实际意义和理论意义害虫是造成农作物、蔬菜、果树减产的主要因素之一，防治害虫危害是农业生产中的关键。目前，对害虫的防治主要依赖于化学农药，它在短期内能起到杀灭害虫的作用，但长期使用会污染环境，危害人类健康，同时还能导致害虫对杀虫剂产生抗药性，降低药效。植物抗虫基因工程技术是现代生物技术研究领域的重要成果，为害虫防治开辟了新途径。利用基因工程手段培育抗虫植物具有以下点：抗虫基因在植物体内稳定地遗传及表达，使植物获得稳定的抗虫性状；育种周期短、目的性强；不存在环境污染问题等。植物抗虫基因工程核糖体失活蛋白(Ribosome Inactivating Proteins, RIPs)是一类能在真核细胞中通过破坏核糖体结构从而抑制蛋白质生物合成的毒蛋白。它，A链具有rRNA N-糖苷酶活性，B链是一个对半乳糖专一的凝集素，可与真核细胞表面的糖蛋白或糖脂的半乳糖部分结合，帮助A链进入细胞。在细胞内，A链就可以破坏核糖体，抑制蛋白质的合成。人们还不清楚RIPs的生物学功能，不能明确地回答为什么植物要合成和积累RIPs然而，体外检测和植物转基因研究结果均表明RIPs对病毒具有广谱的抗性，对植物病原菌和昆虫也有选择性抗性所以RIPs被认为参与植物的自身防御机制。本研究为农作物抗虫基因工程做出贡献二、本课题的研究内容、特色和创新之处，预计突破哪些难题利用RACE技术克隆茶树II型RIP基因的全长cDNA序列利用CR技术克隆茶树II型RIP基因的基因组序列。假眼小绿叶蝉三、本课题的研究方法、步骤、可行性论证，研究工作总体安排及进度和预期成果 利用RACE技术克隆茶树II型RIP基因全长cDNA：利用RNeasy Plant Mini Kit (Qiagen)从冷处理24 h的茶树叶中提取总RNA；按照Clontech公司SMARTTMRACE cDNA Amplification Kit的操作程序构建5-ready RACE cDNA文库和3-ready RACE cDNA文库；根据已克隆的该基因cDNA片段的核苷酸序列设计一对特异性引物，分别以以5-ready RACE cDNA文库和3-ready RACE cDNA文库为模板，扩增该基因cDNA的5末端和3末端，拼接后得到该基因的全长cDNA；根据拼接出的序列，在起始密码子附近和3非翻译区设计一对特异性引物，以SMARTTMRACE cDNA为模板扩增茶树II型RIP基因的ORF，并把扩增产物插入到pMD19-T载体中。利用PCR技术克隆茶树II型RIP基因的基因组序列：利用在起始密码子附近和3非翻译区设计一对特异性引物扩增该基因的基因组序列，并将该基因的cDNA序列和基因组序列进行比较。假眼小绿叶蝉包括基因克隆、消减cDNA文库和全长cDNA文库的构建、Southern杂交、northern杂交、蛋白质的体外表达、植物转基因以及酵母双杂交等，从茶树中分离出一批