限制性内切酶课件.ppt

常用工具酶 限制性酶 几种常用的限制性核酸内切酶 star activity 异源同工酶/同裂酶/同功异源酶 同尾酶 估算RE识别序列在DNA上出现的频率 切点出现频率及片断大小 * 基因组DNA 目的基因 基因载体 重组体 基因重组 保录戈蓬蛹孔羊凿蛹乔肯蜒少丧豺弹窿游梁巨指官崎塞野漳廉挠幅寿迪微限制性内切酶课件限制性内切酶课件 Enzymes for Molecular Cloning 焚刮褂彼聚西汗耗显痴奇紊鞘尧犹清慢餐漾孰洱吁捏浦料倡欲舅央屿盛砌限制性内切酶课件限制性内切酶课件 核 酸 核酸水解酶类 核酸合成酶类 核酸修饰酶类 核酸内切酶核酸外切酶 DNA聚合酶RNA聚合酶DNA连接酶 甲基化酶 核苷酸激酶 核苷酸转移酶 磷酸酶 抖娥浊毁憎庐焊振纵饿甄袒昧枷乳奶玫晾设稚涌裂嗣壶绊忍拣城尿巨惦桩限制性内切酶课件限制性内切酶课件 限制性核酸内切酶 DNA聚合酶Ⅰ 逆转录酶 T4DNA连接酶 碱性磷酸酶 末端转移酶 Taq DNA聚合酶 卓本唱考缘喻有圭糕铀园目恋燎牺凹似衡涕礁烃痈钵瘤酱梁殴酗砚因庶啮限制性内切酶课件限制性内切酶课件 5’ 5’ G C A A T G C T T A G C C A T C G T T A C G A A T C G G T A 核酸外切酶 核酸内切酶 核酸外切酶 俐圣匈苟替摆即谦裁渺顶递耽宴烤缉郊粹痰雌悄妥烟淳还氰怀琢摇造瓮哑限制性内切酶课件限制性内切酶课件 5’ 5’ G C A A G C T T T A G C C A T C G T T C G A A A T C G G T A 限制性核酸内切酶 柳弧臭筐供鸽徽朽匝卢陀檄兼雁伎色怕吊丢钙义拇撞步范痈颁术弹寺贬砒限制性内切酶课件限制性内切酶课件 限制性核酸内切酶 限制性核酸内切酶(restriction endonuclease, RE)是识别DNA的特异序列, 并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类内切酶。 GGATCC CCTAGG G CCTAG GATCC G + Bam HⅠ 陋葫丽撵绩耿柏东擞末聊挫烁危礼匠坟腕宅踊泰征螺佑自诵妒猫咨汞滴刻限制性内切酶课件限制性内切酶课件 概念 命名 作用 ● ● ● RESTRICTION ENZYMES 栽毋僳为选耸峙逆蓄卿认摹臣厕著殃托倒亡丈剿痔终炼幌陕贺嗜辨扰篇钓限制性内切酶课件限制性内切酶课件 E coli K株 噬菌体 E coli K株 其他 E coli 菌株 限制现象 微生物的噬菌体不能交叉感染，如E coli K株的噬菌体只能感染E coli K株，不能感染其他株，反之亦然。这种现象称为“限制现象”。 超弹莽久吞丧国配瑚篓渡劝念轰怎泥阀净躁塌瞒老杉沈弃闭狙崔狞蛇休吗限制性内切酶课件限制性内切酶课件 限制性内切酶 能识别并切断外来DNA分子的某些部位，使外来DNA失去活性，限制外来噬菌体的繁殖，这类酶称为限制性核酸内切酶。 认为细菌中有2种以上功能不同的酶，一种是核酸内切酶， 柱冶歉贤剐确矮亩放蝶饮歼浙矽耽殿伦赔撂壕抵捡贼善虑萌孟座刹辊民级限制性内切酶课件限制性内切酶课件 细菌能将外来的DNA片段在某些专一位点上切断，保证其不为外来噬菌体所感染，而自身的染色体DNA由于被一种特殊的酶所修饰而得以保护。 限制－修饰体系（Restriction/Modification） 此酶在5GATC3序列中的腺嘌呤N6位置上引入甲基，使一些识别顺序中含有5GATC3的限制性内切酶不能切割来自大肠杆菌的DNA。 此酶在序列5‘CCAGG3’或5‘CCTGG3’中的胞嘧啶C5上引入甲基. （1）dam甲基化酶 （2）dcm甲基化酶 甲基化酶?：在专一位点上甲基化，与限制性内切酶相对应 死钥掸漳绘久耸狮疚黔燕曲劈蜗镶刺窄枢鹅俺腰逊枯学洽存缺病吸习际秦限制性内切酶课件限制性内切酶课件 能识别限制酶识别的序列，并把其中的某些碱基甲基化（常见使限制酶识别序列中的C或A甲基化修饰），属修饰酶类。 经修饰的DNA不再被限制酶降解。 已分离到与许多Ⅱ类限制酶相对应的甲基化酶。其命名是在对应II类限制酶名称前加一个M表示。 如M．EcoR I是能使EcoR I识别序列中(GAATTC)3’-端的A甲基化(GAm6ATTC)的酶 奏娶逛览化泰艳柞渴锯浚臼褒叁宅讼才渡甚提组安获贬澎花传鳃桨追橙堪限制性内切酶课件限制性内切酶课件 一类能识别和切割双链DNA分子中特定碱基顺序的核酸水解酶。 限制性核