组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书（中文版）.PDF

SCIENTIFICSINC.U.S.A GMS50556.2v.A 组织铜离子浓度比色法定量检测试剂盒产品说明书 （中文版） 主要用途 组织铜离子浓度比色法定量检测试剂是一种旨在通过偶氮生色底物，与还原后的一价铜反应产生蓝色螯合 复合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化，即采用比色法来测定样品中总铜浓度的权威而经典的技术 方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种动物和人体组织裂解悬液样品中总铜的浓度 检测。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感。 技术背景 铜为人体营养中的必需的微量元素。作为辅因子，含铜酶蛋白在铁和儿茶酚胺 （catecholamine）代谢、游 离自由基清除、血红蛋白、弹力纤维和胶原蛋白合成等活动中起着重要作用，从而调节体内氧化还原状态 铜在肝脏和血浆中以铜蓝蛋白 （caeruloplasmin）形式存在，具有铁氧化酶抗氧化活性。铜含量过低，会导 致智力迟钝、色素脱失、贫血、张力减退、骨坏血病变化。一旦缺失，将导致心脏病变、骨质疏松、骨关 节炎、Menkes综合征、威尔森氏症等。由此，铜含量检测成为威尔森氏症、小细胞低色素性 （microcytic hypochromic anemia）贫血、骨病等的诊断指标。铜的检测包括化学法、火焰光度法 （flamephotometry）、 原子吸收分光光度法等技术，但容易受到其它金属元素的干扰，或者受限于仪器的特殊的要求。4-(3,5-溴 基-2-吡啶偶氮基)-5-(N-乙基-N-磺丙基)苯胺 （4-(3,5-Bromo-2-pyridylazo) -5-(N-ethyl-N-sulfopropyl)aniline； Di-Br-PAESA）比色法是一种稳定、简便、准确的铜检测技术。在弱酸性条件下，铜从复合物中解离出来； 抗坏血酸 （还原型）将解离出来的二价铜离子还原成一价铜离子，一价铜离子与显色剂 DiBr-PAESA生成 蓝色络合物，在分光光度仪下通过吸光峰值的变化 （波长580nm），来定量测定细胞铜的总浓度。其反应 系统为： 产品内容 清理液 （ReagentA） XX 毫升 裂解液 （Reagent B） XX 毫升 去干扰液 （Reagent C） XX 毫升 缓冲液 （Reagent D） XX 毫升 还原液 （Reagent E） XX 瓶 显色液 （Reagent F） XX 毫升 标准液 （Reagent G） XX 微升 产品说明书 1份 保存方式 保存在4℃冰箱里，有效保证3 月 1 用户自备 15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器 1.5毫升离心管：用于样品操作的容器 DOUNCE 匀浆器：用于组织匀化 微型台式离心机：用于样品制备 比色皿：用于反应的容器 分光光度仪：用于比色分析 实验步骤 一、样品准备 1． 手术取出动物组织，并秤重以确定500毫克组织重量 2． （选择步骤）放进预冷的15毫升锥形离心管 3． （选择步骤）加入XX 毫升清理液 （ReagentA）清洗 1次 4． 移入到一个液氮冻存管 5． 即刻放进液氮罐过夜 6． 次日从液氮罐里取出，即刻 （最快速度）用研磨棒碾碎组织成粉末状 （注意：切莫使组织冻融） 7． 放进一个 15毫升锥形离心管 8． 加入预冷的XX 微升裂解液 （Reagent B） 9． 涡旋震荡5秒，充分混匀 10．即刻放进预冷的DOUNCE 匀浆器，在冰槽里用匀浆棒匀化组织 （约40 下） 11．转移到预冷的1.5 毫升离心管 12．放进4℃微型台式离心机离心5 分钟，速度为 16000g （或 13000RPM，例如eppendorf 5415） 13．小心移取500微升上清液到新的预冷的1.5毫升离心管 14．移取 10微升进行蛋白定量