L-多巴药物的制备及生化工艺.pdfVIP

2005年10月第2卷第17期 ·药物研究· —H卜 L一多巴药物的制备及生化工乙 董青刘坚陈可夫 (湖北省荆门职业技术学院医学分院448000) 【摘要] 根据生物制药原理，用黄曲霉菌种通过微生物发酵作用大量产生黄曲霉，再度利用黄曲霉中的0一酪氨酸酶的作用 把L一酪氨酸转化成L一多巴；孝4用生化工艺方法，通过系列的实验达到提纯目的药物。 【关键词] 微生物发酵转化离子交换层析L一多巴 d～丙氨 L一多巴的化学名称为p～3，4一二羟苯基 菌后将菌丝体悬浮液按种至三角瓶中，32℃通风培养20h。再 酸，又名3一羟基一L酪氨酸，为白色结晶性粉末，无臭无味， 熔点276～278℃，在乙醇、氯仿和丙酮中不溶，在稀酸中易溶， ％～7％接种量接种，在32℃下，用先前准备好的通风器和搅 是治疗震颤麻痹的高效药物，机理为进入脑循环而达中枢神经 系统，转变为儿苯酚胺而发挥治疗作用。L一多巴传统的制取方 法是从植物猫豆中经科学提取，生物制取法是以L一酪氨酸为 量接种，所用的培养基为发酵培养基，在30～32℃下，以1：1 原料，通过霉菌如黄曲霉及米曲霉和细菌如假单孢杆菌等细胞 内D一酪氨酸酶作用产生。通过微生物发酵产生的目的产物L 滤，收集菌体备用。 多巴，再利用生化捉取工艺来制取药物。 2．3转化反应取2109L一酪氨酸，3509抗坏血酸，加 1 工艺流程 入蒸馏水，充分溶解后，用2mol／L氢氧化钠溶液调PH值至3． 培养 培养 斜IfIi赫种—————，培养液————_荫丝体 气搅拌反应器中，加入上述制得的黄曲霉菌丝体，质量为3509， 1．， {转 I化 过滤 充分反应1．5～2h，当转化率达到90％以上时，立即过滤，收 酪氰髓 -底物溶液—————————．．转化淑 -滤液 集滤液，滤液中含有L一多巴和其它杂质。 2．4离子交换层析和洗脱将已处理好的732强阳离子交 峨jj『j 洗强洗脱 过瓣 换树脂装柱，装柱时要均匀，不出现气泡，树脂粒面要平无空 ————+吸刚枉———————}洗腑订芷 -滤液 滤液 隙，树脂体积为200ml，将上述含有L一多巴的滤液与树脂充分 732树脂 水、¨S0； CaC0、 柱后用3～4倍柱床体积的无离子水以同样流速洗涤柱床，然后 浓绷 缈牖过滤 霹结，*挝滤 _|_惧 用lmol／L的硫酸溶液以同样流速进行洗脱，同时收集洗脱液。 ————}浓稍被 -粘l品多巴——————-多巴栅晶——．-曲¨J彩巴成品 2．5中和、浓缩与结晶 将上述L一多巴洗脱液加热至 i℃ j℃ 60℃，搅拌下加入CaCO，固体粉末，中和洗脱液酸性，调至 2 药物的制取 2．1材料树脂处理、培养基配备 2．1．2树脂处理用量筒量取732强阳离子交换树脂倒 止，于5℃下过夜结晶，次日过滤取结晶，用少量无离子水洗涤 入大烧杯中用清水冲洗4次，将洗过的树脂：清水=1：3的烧 1～2次，再通过高速离心，收集下沉物质，得L多巴粗品。