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四川农业大学硕士研究生课程考试试题 课程名称：高级生物化学(总分100) 适用专业年级：2008级各专业 主考教师：杨婉身 陈惠 考试时间：2008.12.27 考生姓名： 专业 学号 一、名词解释（任选作8题，多选不计分，每题5分，5×8=40） 1、primary actic transport 2、noncoding RNA非编码RNA 3、AFLP 4、亲和层析 5、具有酶活性受体 6、拉氏构象图 7、朊病毒 8、协同效应 9、Hsp70系统 10、Kcat型不可逆抑制剂 二、简答题（任选作5题，多选不计分，每题6分，6×5=30） 1、简述DNA酶法测序的基本思路。 2、DNA超螺旋形成的意义是什么？ 3、简述信号肽假说的主要内容。 4、为什么说端粒酶是一种逆转录酶？ 5、胞内Ca2+信号与才AMP信号产生和灭活的区别是什么？ 6、蛋白质凝胶过滤和超滤是一回事吗？请解释？ 7、绘出血红蛋白和肌红蛋白的氧合曲线图，对血红蛋白与肌红蛋白的氧合特点进行分析。 8、设计实验判断可逆与不可逆抑制作用。 三、问答题（任选作三题，多选不计分，10×3=30） 1、为什么同工酶可以作为一种分子标记？试以超氧化物岐化酶的电泳方法为例阐述同工酶染色的原理及其优越性。 2、阐述细胞信号转导的主要阶段及意义。 3、阐述氧化磷酸化偶联的机制，比较线粒体氧化磷酸化和叶绿体光和磷酸化的异同。 4、酶高效催化的根本原因是什么？有哪些影响因素？结合实例讨论影响酶催化效率的主要因素。 5、试述细胞内蛋白质降解途径及其生物学意义。 RFLP: 1974年Grodzicker等创立了限制性片段长度多态性(RFLP)技术，它是一种以DNA—DNA杂交为基础的第一代遗传标记。RFLP基本原理：利用特定的限制性内切酶识别并切割不同生物个体的基因组DNA，得到大小不等的DNA片段，所产生的DNA数目和各个片段的长度反映了DNA分子上不同酶切位点的分布情况。通过凝胶电泳分析这些片段，就形成不同带，然后与克隆DNA探针进行Southern杂交和放射显影，即获得反映个体特异性的RFLP图谱。它所代表的是基因组DNA在限制性内切酶消化后产生片段在长度上差异。由于不同个体的等位基因之间碱基的替换、重排、缺失等变化导致限制内切酶识别和酶切发生改变从而造成基因型间限制性片段长度的差异。RAPD技术是1990年由Wiliam和Welsh等人利用PCR技术发展的检测DNA多态性的方法。基本原理：它是利用随机引物（一般为8—10bp）通过PCR反应非定点扩增DNA片段，然后用凝胶电泳分析扩增产物DNA片段的多态性。扩增片段多态性便反映了基因组相应区域的DNA多态性。RAPD所使用的引物各不相同，但对任一特定引物，它在基因组DNA序列上有其特定的结合位点，一旦基因组在这些区域发生DAN片段插人、缺失或碱基突变，就可能导致这些特定结合位点的分布发生变化，从而导致扩增产物数量和大小发生改变，表现出多态性。就单一引物而言，其只能检测基因组特定区域DNA多态性，但利用一系列引物则可使检测区域扩大到整个基因组，因此，RAPD可用于对整个基因组DNA进行多态性检测，也可用于构建基因组指纹图谱AFLP是1993年荷兰科学家Zbaeau和Vos发展起来的一种检测DN A多态性的新方法。AFLP 是 RFLP 与PCR相结合的产物，其基本原理是先利用限制性内切酶水解基因组 DNA 产生不同大小的 DNA 片段，再使双链人工接头的酶切片段相边接，作为扩增反应的模板 DNA，然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增，最后在接头互补链的基础上添加 1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DNA 基因再进行选择性扩增，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测获得的DNA扩增片段，根据扩增片段长度的不同检测出多态性。引物由三部分组成：与人工接头互补的核心碱基序列、限制性内切酶识别序列、引物3’端的选择碱基序列（1—10 bp）。接头与接头相邻的酶切片段的几个碱基序列为结合位点。该技术的独特之处在于所用的专用引物可在知道 DNA 信息的前提下就可对酶切片段进行PCR 扩增。为使酶切浓度大小分布均匀，一般采用两个限制性内切酶，一个酶为多切点，另一个酶切点数较少，因而 AFLP 分析产生的主