微生物基本操作讲义课件.ppt

微生物检测的基本操作知识;主要内容：;§ 1 　清洗、消毒和灭菌;消毒灭菌的方法 ;（一）物理消毒灭菌法;加热灭菌和加热消毒的方法：;干热灭菌法;湿热灭菌法;3. 间歇灭菌法（fractional sterilization）:将待灭菌的物品100℃ 加热15～30分 钟，杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置于37℃温箱中过夜使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸 汽加热，如此连续三次，可将所有细菌繁殖体和芽胞全部杀死。 4.高压蒸汽灭菌法：是灭菌效果最好、目前应用最广的灭菌方法。方法是在一密闭蒸锅—高压蒸汽 灭菌器内进行的。通常 在1.05kg/cm2的压力下，温度达121.3℃,维持15～30分钟，可杀死包括细菌芽胞在内的所有微生物。 此法适用于耐高温和不怕潮湿物品的灭菌。;2.紫外线与射线灭菌法;3.滤过除菌;当蜀炼俄七豌羞吃豢憨豆学阑池习眶胯姑蚀赶盏缉将喇幻拷办后节怜底芭微生物基本操作讲义课件微生物基本操作讲义课件;（二）化学消毒法;消毒剂类别 ;影响消毒灭菌效果的因素 ;§ 2　显微操作;枚孕直禹腺硬味肚尊座狠恢邹秘计鬼圾薪供颐超魏戈脱拈柿馁答章暮思钠微生物基本操作讲义课件微生物基本操作讲义课件;普通显微镜的使用方法 ;普通显微镜的保养 ;染色方法;(二)复染色法 　用两种或多种染料染细菌，目的是为了鉴别不同性质的细菌，所以又叫鉴别染色法。主要的复染色法有革兰氏染色法和抗酸性染色法。 　革兰氏染色法：不仅能观察到细菌的形态，而且还可将所有细菌区分为两大类： 　染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示； 　染色反应呈红色的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。 　细菌对革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。;实验材料;实验内容与步骤;3．固定 手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰外层尽快的来回通过2~3次，共约2~3秒钟，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉过烫为宜（不超过60℃）,放置待冷后，进行染色。 4．染色 在涂片薄膜上滴加染色液(石炭酸复红、草酸铵结晶紫或美蓝任选一种)一滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 5．水洗 斜置载玻片，在自来水龙头下用小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 6．干燥 用吸水纸吸去涂片边缘的水珠，置于室温下自然干燥。用吸水纸时切勿将菌体擦掉。 ;7．镜检 (二)细菌的革兰氏染色步骤 涂片→干燥→固定→初染→水洗→媒染→水洗→脱色→水洗→复染→水洗→干燥→观察 1．取培养物分别做涂片、干燥、固定，方法均与简单染色的相同。 2．用草酸铵结晶紫染色1min后水洗。 3．加碘液媒染1min后水洗。 4．斜置载玻片，滴加95％乙醇脱色，至流出的乙醇不现紫色 为止，大约需时20~30s，随即水洗。 ;5．用蕃红染液复染1min，水洗。 6．用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下，用低倍镜观察，发现目的物后用油镜观察，注意细菌细胞的颜色。 ;革兰氏染色图解 ;步骤1：用蒸馏水滴瓶滴一小滴蒸馏水于洁净的载玻片上 ;步骤2：用无菌操作法取少许培养物于蒸馏水滴上 ;步骤3：用接种环将培养物涂布成一薄层 ;步骤4：风干 ;步骤5：在酒精灯火焰外层尽快的来回通过3-4次固定 ;步骤6：结晶紫染色1分钟 ;步骤7：用蒸馏轻轻冲洗玻片 ;步骤8：革兰氏碘液染色1分钟，再用蒸馏水轻轻冲洗 ;步骤9：酒精脱色至下滴液为无色，立即用蒸馏水冲洗 ;步骤10：番红复染1分钟，用蒸馏水轻轻冲洗 ;大肠杆菌（Escherichia coli）革兰氏染色图 ;金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）革兰氏染色 ;注意事项;同郭曲黎斯蔓仓厂颂荔祸地乱止跋耪兢幕纳汤柿别要瑶筷芽傍帮宗忙爱筒微生物基本操作讲义课件微生物基本操作讲义课件;王龋察乒桐跟蛹土他曳蚀派搬获辙接瑞贷庙兆缸区抬蔗援骏合叛颈懊你僵微生物基本操作讲义课件微生物基本操作讲义课件;4.培养基制备的基本方法和注意事项 ;4.2培养基的制备记录;4.3培养基成分的称取;4.4培养基各成份的混合和溶化;4.5培养基pH的初步调正;4.6培养基的过滤澄清;4.7培养基的分装;　　分装时最好能使用半自动或电动的定量分装器。分装琼脂斜面培养基时，分装量应以能形成2/3底层和1/3斜面的量为洽当。 　　分装容器应预先清洗干净并经干烤消毒，以利于培养基的彻底灭菌。每批培养基应另外分装20ml培养基于一小玻璃瓶中，随该批培养基同时灭菌，作为测定该批培养基最终pH之用。;4.8培养基的灭菌;4.9培养基斜面和平板的制作 ;平板的制作应在火旁进行，右手拿锥形瓶的底部或试管，左手同时用小指和手掌将棉塞打开，灼烧瓶口，用左手大