Chapter06 细菌与噬菌体的遗传重组.ppt

湖北大学生命科学学院 陈建国 待解决问题 细菌、噬菌体有什么特点？ 细菌、噬菌体中的基因是如何进行遗传重组？ 如何进行基因定位的？ 细菌和噬菌体在遗传学研究中的优越性 世代周期短 大肠杆菌（Escherichia coli ）20分钟可繁殖一代 便于管理和生化分析 个体小，一半在1μm至几μm之间，操作管理方便 便于研究基因突变 裸露的DNA分子（有的噬菌体为RNA分子），容易受环境条件的影响而发生突变；单倍体生物，不存在显性掩盖隐性问题，隐性突变也能表现出来 便于研究基因的作用 影印培养，易检测出营养缺陷型突变，有利于从生化角度来研究基因的作用 便于研究基因重组 细菌具有转化、转导和接合作用，可以进行精密的遗传分析 便于研究基因的结构、功能和调控机制 细菌和噬菌体的遗传物质简单，易于进行基因定位、结构分析和分离，基因的表达调控也使用能够与采用生理生化的方便进行深入研究 便于进行遗传操作 染色体结构简单，没有组蛋白和其他蛋白的结合，更宜于进行遗传工程的操作 1. 细菌的遗传分析 1. 2 大肠杆菌的突变型及筛选 1.2.3 E.coli作遗传研究材料的优点 （1） 有许多营养缺陷型 ，且易于选择和鉴定 （2） 生活周期短：繁殖快，积累代谢物质多 （3） 结构简单: DNA裸露，单倍性，利于基因精细结构和基因功能表达调控的研究 1.3 细菌的遗传重组 1、细菌的接合与中断杂交作图 2、 F′因子和性导 3、细菌的转化与作图 Lederberg和Tatum本以为参与接合的两个突变株接扮演同样角色，即都会变成原营养型菌株，但后来Hayes的实验推翻了这个观念 。 1.3.1.3 F因子和高频重组 F因子（F factor）： Hayes等进一步研究发现，大肠杆菌在接合中作供体的能力受细胞内一种致育因子(fertility factor, F因子; sex factor, 性因子)控制。携带F因子的菌株称供体菌或雄性，用F+表示，没有F因子的菌株称为雌性，用F-表示。 F因子的化学本质是DNA，可以自主状态存在于细胞质中或整合到细菌的染色体上。 F因子可以在细菌细胞间进行转移并传递遗传物质。 细菌基因重组的特点: （2）实验过程： 两种菌混合培养，计时t=0 每隔一定时间搅拌菌液，打断结合管以中断杂交。 稀释菌液，测试其基因型，以便确定每个基因转移到F-细胞的时间。 F`因子携带的细菌染色体长度是不同的； F`因子携带全部的F因子基因； F`因子具有侵染性。 1、以大肠杆菌为例， F因子三种不同的存在状态： F因子（F+、F-） F’因子 Hfr 2、带有自由状态的F因子的菌株--------F+菌株 不带F因子的菌株------------------F-菌株 F因子整合到染色体上的------------Hfr菌株 含F`因子的菌株------------------ F`菌株 3、四种菌株之间的相互侵染及转变关系。 1.3.3 细菌的转化与作图 1.3.3.2 转化与作图 第一步：确定两个基因是否为连锁关系 第二步 计算重组值 问题：40≠13+34？ （1）烈性噬菌体的繁殖 遗传学上应用较广泛的是大肠杆菌的T噬菌体。 （2）温和性噬菌体的繁殖 温和噬菌体侵入细菌后，有两种选择途径，裂解途径和溶源途径。两种途径所产生的生活周期分别称为裂解周期和溶原周期。 例如：λ噬菌体裂解周期与烈性噬菌体的感染周期相似； 溶原周期的λ噬菌体则附着在大肠杆菌染色体的gal和bio位点之间的attλ座位上，它能通过交换而整合到细菌染色体上，整合的噬菌体称为原噬菌体。 含有原噬菌体的细菌称为溶源性细菌，对同种噬菌体不敏感，具有免疫性。 Lederberg和Zinder等1956年在对伤寒沙门氏菌的研究中发现了转导现象。 LT-22 是携带P22的溶源性细菌，LT-2是对P22敏感的非溶源性细菌。 2.4.1 普遍性转导与作图 普遍性转导： 供体基因组中所有基因具有同等机会被转导形成部分二倍体，经交换和重组后形成不同的转导子，这种转导称为普遍性转导。 普遍性转导的过程： 普遍性转导的特点： （1）频率很低； 一般只有0.3%的噬菌体是转导噬菌体。 （2）如果细菌的两个基因距离较大，大于噬菌体的染色体长度，一般就不能同时被转导。 （3）如果细菌的两个基因被同时转导说明两个基因紧密