分子教案第三章DNA的生物合成.docVIP

第三章 DNA的生物合成 教学重点：1．DNA的半保留复制及DNA的半不连续复制2．DNA复制的方式3．DNA复制的调控 教学难点：线形DNA复制末端问题的解决 教学时数：7学时 教学要求：1．掌握并理解DNA复制的特点 2．掌握并理解DNA复制的过程 3．掌握并理解DNA复制的主要方式 4．掌握并理解线性DNA复制末端缩短问题的解决方式 5．了解DNA复制的调控方式 教学方式：讲述、演示与计算机辅助教学 教学内容： 1. DNA复制的特点 证明DNA是遗传物质的两个关键性实验：首先用实验证明基因就是DNA分子的是美国的微生物学家Avery.他的实验是用肺炎球菌感染小鼠 。美国遗传学家Hershey用T2噬菌体感染大肠杆菌实验，也证明DNA是遗传物质。 这两个实验中主要的论点证据是：生物体吸收的外源DNA改变了其遗传潜能。 目前认为生物界遗传信息传递的中心法则为 Replication of duplex DNA is a complex endeavor involving a conglomerate of enzyme activities. Different activities are involved in the stages of initiation, elongation, and termination. 图1 双螺旋DNA的复制 1.1 DNA的半保留复制(semiconservative replication) Watson和Crick在提出DNA双螺旋结构模型时即推测，DNA在复制时首先两条链之间的氢键断裂两条链分开，然后以每一条链分别做模板各自合成一条新的DNA链，这样新合成的子代DNA分子中一条链来自亲代DNA，另一条链是新合成的，这种复制方式为半保留复制。 1958年Meselson和Stahl利用氮标记技术在大肠杆菌中首次证实了DNA的半保留复制，他们将大肠杆菌放在含有15N标记的NH4Cl培养基中繁殖了15代，使所有的大肠杆菌DNA被15N所标记，可以得到15N桪NA。然后将细菌转移到含有14N标记的NH4Cl培养基中进行培养，在培养不同代数时，收集细菌，裂解细胞，用氯化铯(CsCl)密度梯度离心法观察DNA所处的位置。由于15N DNA的密度比普通DNA(14N－DNA)的密度大，在氯化铯密度梯度离心(density gradient centrifugation)时，两种密度不同的DNA分布在不同的区带。 实验结果表明：在全部由15N标记的培养基中得到的15N桪NA显示为一条重密度带位于离心管的管底。当转入14N标记的培养基中繁殖后第一代，得到了一条中密度带，这是15N桪NA和14N-DNA的杂交分子。第二代有中密度带及低密度带两个区带，这表明它们分别为15N14N－DNA和14N14N-DNA。随着以后在14N培养基中培养代数的增加，低密度带增强，而中密度带逐渐减弱，离心结束后，从管底到管口，CsCl溶液密度分布从高到低形成密度梯度，不同重量的DNA分子就停留在与其相当的CsCl密度处，在紫外光下可以看到DNA分子形成的区带。为了证实第一代杂交分子确实是一半15N-DNA－半14N－DNA，将这种杂交分子经加热变性，对于变性前后的DNA分别进行CsCl密度梯度离心，结果变性前的杂交分子为一条中密度带，变性后则分为两条区带，即重密度带(15N－DNA)及低密度带(14N－DNA)。它们的实验只有用半保留复制的理论才能得到圆满的解释(图2和16-3)。 图2　DNA的半保留复制第一代分子含有一条亲代的链(用黑色素示)，与另一条新合成的链(用白色表示)配对。在以后的连续复制过程中，原来亲代的两条链仍然保持完整，因此总有两个分子各具有一条原来亲代的链 ? 图3　DNA的半保留复制－Meslson Stahl实验密度梯度离心后的DNA 位置：左三管为对照；右三管为实验结果 1.2 半不连续性复制（DNA synthesis is semidiscontinuous） Lagging strand of DNA must grow overall in the 3′-5′ direction and is synthesized discontinuously in the form of short fragments (5′-3′) that are later connected covalently.Leading strand of DNA is synthesized continuously in the 5′-3′ direction.Okazaki fragments are the short stretches of 1000-2000 bases produc