儿童门静脉海绵样变性脾静脉中NFκB、VEGF表达及意义.docVIP

儿童门静脉海绵样变性脾静脉中NFκB、VEGF表达及意义【摘要】 目的 研究门静脉海绵样变性患者脾静脉NFκB、VEGF的表达，以探讨门静脉海绵样变性巨脾的形成机制。方法 取7例门静脉海绵样变性患者脾静脉石蜡切片作为实验组，8例车祸伤脾脏挫裂伤脾静脉石蜡切片作为对照组，通过免疫组化测定NFκB、VEGF的表达，t检验检验两者差异有统计学意义。结果 实验组脾静脉NFκB、VEGF阳性颗粒明显多于对照组，半定量测定实验组的表达量高于对照组，两者差异有统计学意义(P0.05)。结论 门静脉海绵样变性血管病变及巨脾形成可能与NFκB、VEGF有关。 【关键词】 门静脉海绵样变性；核转录因子κB；血管内皮生长因子；脾静脉 The expression and significance of NFκB and VEGF in the splenic vein of cavernous transformation of portal vein of childrens MAO Jianxiong, LIU Lei,WANG Bin, et al.Department of General Surgery,Shenzhen City Childrens Hospital,Shenzhen 518026，China 【Abstract】 Objective To research portal vein cavernous transformation of splenic vein in patients with NFκB, VEGF expression, to explore the forming mechanism of portal vein cavernous transformation of splenomegaly. Methods 7 cases of portal vein degeneration in patients with splenic vein paraffin sections as an experimental group, eight cases of traffic accident in the spleen contusion and laceration of the splenic vein paraffin sections as a control group, the determination of NFκB, VEGF expression by immunohistochemistry, the ttest test significant difference between the two.省略 门静脉海绵样变性(cavernous transfromation of portal vein,CTPV)是儿童比较少见的疾病，但近年来随着影像学诊断技术的进步，诊断率逐渐提高。门静脉海绵样变性患儿肝功能多无异常，主要表现为肝前性门静脉高压，消化道出血是其主要的症状及死亡原因，脾脏增大及脾功能亢进是本病的特征之一。本研究通过测定患者脾脏中NFKB及VEGF的表达探讨CTPV患者脾脏增大的机制。 1 资料与方法 1.1 一般资料 取2000年2月至2007年3月期间确诊门静脉海绵样变性并行分流术患者脾静脉石蜡切片7例作为实验组；对照组取车祸伤脾挫裂伤行脾切除患者脾静脉石蜡切片8例，脾切除前无脾脏方面的病变。 1.2 实验试剂 兔多抗 NFκBp65 抗体，鼠单抗 VEGF(IgG)抗体，兔超敏二步法免疫组化试剂盒，鼠超敏二步法免疫组化试剂盒，浓缩型DAB试剂盒, 均购自北京中杉金桥公司。 1.3 实验仪器 石蜡切片机 LEICA RM 2135(Leica 公司)，显微镜 DMLB30(Leica 公司)，显微镜成像系统(高通公司)，隔水式恒温培养箱 GNP9160(上海精宏实验设备有限公司)，电子干燥箱 LG050B，APES 载玻片(北京中杉金桥公司)，微波炉(Panasonic)。 1.4 实验方法 1.4.1 免疫组化步骤 石蜡切片脱蜡至水，PBS冲洗，浸泡于含3%H2O2去离子水10 min，将切片放入枸橼酸盐缓冲液中，微波炉内加热，使容器内液体温度达到在92℃～98℃之间并维持10～15 min。取出容器，室温中冷却10～20 min。PBS冲洗，滴加VEGF (或NFκBp651:100) 一抗抗体，于湿盒内4℃过夜孵育。PBS冲洗，分别滴加试剂1，室温孵育20 min，PBS冲洗，滴加试剂2，室温孵育20 min，PBS冲洗，用DAB显色，显微镜下控制显色时间，自来水冲洗终止显色，苏木素复染，