精氨酸合成途径关键酶基因的过量表达及其对L-精氨酸合成的影响.pdfVIP

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2014, Vol.30, No.3 精氨酸合成途径关键酶基因的过量表达 及其对L-精氨酸合成的影响 黄园园，郑穗平 （华南理工大学生物科学与工程学院，广东省微生物酶学重点实验室，广东广州 510006） 摘要：由 CarAB 、ArgD、ArgJ 三个基因分别编码的氨基甲酰磷酸合成酶、乙酰鸟氨酸转氨酶、鸟氨酸乙酰基转移酶是 L-精氨 酸合成途径的关键酶。以谷氨酸棒杆菌 ATCC14067 为出发菌株，利用大肠杆菌-谷氨酸棒杆菌的穿梭质粒 pEC-XK99E-p’ 、 PEC-T18mob2 ，分别对精氨酸生物合成途径的关键酶基因 CarAB 、ArgD、ArgJ 进行单个基因表达、对 ArgD、ArgJ 基因进行串联表 达以及对 CarAB 、ArgD、ArgJ 三个基因进行共表达，分别得到过量表达菌株 14067-pEC-CarAB 、14067-T18-ArgD、14067-T18-ArgJ、 14067-T18-ArgDJ、14067-pEC-CarAB-T18-ArgDJ。检测上述三个基因单独表达，串联表达及共表达对 L-精氨酸产量的影响。摇瓶发 酵实验证明，这五株菌产精氨酸的能力较出发菌株ATCC14067 分别提高了 1.61、1.14、1.19、1.28、2.91 倍。产量最高的共表达菌株 14067-pEC-CarAB-T18-ArgDJ ，通过实时荧光定量 PCR 检测，表明 CarA 、CarB 、ArgD、ArgJ 基因的表达量分别是 ATCC14067 的 2.50、5.60、3.59、4.70 倍。这表明过量表达基因 CarAB 、ArgD、ArgJ 可以有效提高精氨酸的产量。 关键词：谷氨酸棒杆菌；过量表达；共表达；L-精氨酸 文章篇号：1673-9078(2014)3-58-63 Overexpression of Key Enzymes in Arginine Biosynthetic Pathway and their Effects on L-arginine Production HUANG Yuan-yuan, ZHENG Sui-ping (College of Biological Science and Engineering, South China University of Technology, Guangdong Key Laboratory of Fermentation and Enzyme Engineering, Guangzhou 510006, China) Abstract: Carbamoyl phosphate synthase, Acetyl ornithine amino transferase and ornithine acetyl transferase encoded by CarAB, ArgD and ArgJ were the key enzymes in L-arginine biosynthetic pathway. In Corynebacterium glutamicum ATCC14067, with the plasmids pEC- XK99E-p and PEC-T18mob2, the genes of CarAB, ArgD and ArgJ in the arginine biosynthetic pathway were expressed individually, ArgD and ArgJ were overexpressed in series and the CarAB, ArgD and ArgJ were co-expressed. The ability of producing L-ar