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拟南芥AT14A蛋白相互作用蛋白的筛选及验证
孙勤富：拟南芥ATl4A互作蛋白的筛选和验证
目 录
摘 要……………………………………………………………………………………………I
Abstract………………………………………………………………………………………………………………………··III
英文缩略词………………………………………………………………………………………V
第一章文献综述…………………………………………………………………………………l
1．1引言……………………………………………………………………………………………l
1．2拟南芥ATl4A蛋白…………………………………………………………………………1
1．2．1动物整合素……………………………………………………………………………1
1．2．2植物类整合素…………………………………………………………………………2
1．2．3
ATl4A蛋白的发现……………………………………………………………………4
1．2．4
ATl4A蛋白的结构和性质……………………………………………………………5
1．2．4．1
ATl4A的结构与定位…………………………………………………………”5
1．2．4．2ATl4A蛋白同源性分析………………………………………………………”6
1．2．5
ATl4A的研究进展………………………………………………………………6
1．3蛋白的相互作用研究………………………………………………………………………”7
1．3．1蛋白相互作用的研究方法……………………………………………………………7
1．3．1．1亲和纯化／质谱法………………………………………………………………·8
1．3．1．2酵母双杂交法……………………………………………………………………-8
1．3．2蛋白相互作用的研究进展…………………………………………………………一lO
1．3．2．1相互作用组学…………………………………………………………………1l
1．3．2．2作为系统生物学研究工具……………………………………………………1l
1．3．2．3新兴Y2H系统………………………………………………………………”12
第二章酵母双杂交法筛选ATl4A蛋白互作蛋白……………………………………………14
2．1引言………………………………………………………………………………………………………………………．14
2．2材料与方法…………………………………………………………………………………14
2．2．1质粒与试剂…………………………………………………………………………．．14
2．2．2
ATl4A基因的克隆与诱饵质粒的构建………………………………………………14
2．2．2．1拟南芥RNA的提取…………………………………………………………．14
2．2．2．2
cDNA第一链合成……………………………………………………………。15
2．2．2．3
扬州大学硕士学位论文
2．2．2．4重组诱饵质粒的构建与转化…………………………………………………16
2．2．3利用重组诱饵质粒筛选拟南芥eDNA文库………………………………………-16
2．2．3．2重组诱饵质粒自激活及毒性检测……………………………………………·17
2．2．3．3eDNA文库筛选………………………………………………………………·l7
8
2．2．3．4阳性菌落pGADT7文库质粒测序分析……………………………………．．1
2．2．4质粒相互作用的二次验证……………………………………………………………18
2．3结果与分析…………………………………………………………………………………19
2．3．1
2．3-2构建诱饵重组质粒……………………………………………………………………19
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