拟南芥类蛋白激酶基因AtACDO1调控叶绿素降解和抗氧化的研究.pdf

博士研究生姓名： 杨松光 院 (系)：生命科学学院 专 业： 细胞生物学 指导老师： 阳成伟教授 李玲教授 时 间： 2010年05月 0IPl llllf 474 onthe ofAtACD01on Study regulation chlorophyll andantioxidationin thaliana degradation Arabidopsis Doctoral Candidate：Song--guangYang or：Cell Maj Biology Supervisor：ProfessorCheng—weiYang ProfessorLi Ling Scho SouthCh 酶的研究较少，对于其在植物中的功能更相知甚少。本实验室在拟南芥中克隆到 Kinaserelated to 一个编码ABCl类蛋白激酶的基因，AtACD01(△BCl．1ike and O_xidative ChlorophyllDegradation stress)，在对拟南芥和水稻ABCl基因家族 成员进行了生物信息学分析和表达模式的整体研究基础上，进一步对拟南芥 AtACD01基因的功能进行了深入研究，着重探讨该基因在叶绿素代谢以及抗氧 化胁迫方面的作用，并探究了其可能的作用机理。主要取得了以下结果： l、拟南芥和水稻ABCl类蛋白激酶家族生物信息学分析发现，在拟南芥中该家族 化上可分为3个亚家族，同时发现水稻和拟南芥成员间的进化关系较各自物种 本身成员之间更近。亚细胞定位预测发现该家族成员大多定位于叶绿体或线 粒体。 2．利用RT-PCR分析了拟南芥和水稻中该家族成员在不同胁迫条件下的基因表达 下调。同时，大部分AtABCIPs受SA诱导，而伽BCJ风则对SA没有响应。 摘要 明该基因在拟南芥的根、茎、叶、花、角果等组织中均有表达，且叶片中表 达最强。这与利用AtACD01基因的启动子驱动GUS报告基因的研究结果相 一致。AtACD01．GFP转化植物后提取原生质体，用共聚焦激光显微镜观察 发现AtACD01定位于叶绿体。 4、表型分析发现，拟南芥AtACD01敲减转基因植株(AtACD01RNAi)在正常 培养条件下叶片泛黄，且叶片长度、宽度以及叶面积变小，但是单位面积叶 片鲜重不变。进一步的研究发现，AtACDOIRNAi株系中叶绿素和类胡萝卜 素(新黄质、紫黄质、叶黄素和p．胡萝b素)含量显著低于野生型，且两种 色素者呈一定比例减少，但透射电镜观察叶绿体和线粒体超微结构未发现其 在AtACDOIRNAi株系与野生型有差异。NB．PAGE和蔗糖梯度离心分析光