拟南芥ess突变体定位克隆和遗传分析.pdfVIP

学校代码：10246 学 号：011023462 曰～ 博 饪士 掌 大位 擎论 文 拟南芥ess突变体定位克隆及遗传分析 院系(所)： 生命科学院 专 业： 遗传学 姓 名： 刘天磊 指导教师： 沈大棱教授 2004年11月5曰 完成日期： 采镪静鼍 复旦大学博J：论文 拟南芥eS$突变体定位克隆及遗传分折 摘 要 一、eSS突变体的定位克隆及遗传分析 花药发育涉及植物发育中最为复杂的生物学过程，花药发育的研究对于理 解植物个体发育各个方面都有重要借鉴意义。花药发育研究进展得益于花药突变 体的遗传分析，尤其是对模式材料拟南芥雄性不育突变体的分析。花药发育突变 体的基因己被克隆的为数不多，任何一个新突变体的鉴定及相关基因的克隆必然 代表着花药发育过程一个新节点的发现，『F是这些节点勾勒出植物发育的轮廓。 目前在几种作物中克隆的CMS雄性不育恢复基因，他们都是核基因，却编码一 个PPR蛋白，ess突变体的研究不仅对了解花药发育提供线索，而且对理解线粒 体参于的经由PPR类蛋白调节的植物雄性育性的研究提供参考。E镕基因的同 源比较表明其并非一个代谢途径或细胞中的结构组分，可能是一类调节基因或调 节基因辅助成分，因此对于ESS的研究可能为人为控制雄性育性提供帮助。雄 性不育一直是备受关注的生物学问题，深入的了解雄性不育的机制便于生产上的 利用。生物进化的保守性，使得模式植物中取得的进展很快就能在作物中得到印 证和利用。图位克隆是发现新基因的重要手段。近几年拟南芥图位技术取得重大 突破，形成了标准化的定位程序。国内也有许多实验室从事拟南芥的定位研究， 但是利用CAPC数据资源进行定位尚未见报道。我们不仅利用CAPC数据资源 进行定位，而且还发展了近30个新分子标记，在分子标记的检测方面发展了异 源双螺旋分析技术。我们的工作还为定位克隆研究者提供了一个可供参考的操作 程序，丰富了拟南芥的定位技术。 在EMS诱变处理的M2群体中分离了一个早期果荚短小的突变体ess，通过 对ess突变体的形态分析和显微观察，发现eSS突变体有以下特点：早期果荚短 小，果荚总数增多，种子量减少。花期推迟，主茎次级分枝高达主茎，成熟期次 生生长弱于野生型。解剖结构发现．传粉时花粉量减少，花丝短，花药外观呈褐 色，稀见花粉粒，雌蕊及柱头外观正常。花粉萌发未见异常。杂交结果证实ess 突变体雌蕊发育『F常，属雄性生殖异常的突变体。在花药不同发育时期的显微观 表皮下形成空洞且可见败育花粉。果荚变短、种子量的减少均源于花粉量不足造 成的。至于ESS基因通过何种途径引起主茎优势减弱，主茎侧枝高至主茎以及 成熟期次生生长减弱还不得而知，可能是ESS基因多效性的一个方面，其分子 机制尚待进一步的研究。 经过图位分析将eSS突变体定位于第一染色体F12K1l克隆的右端与F4H5 ATl06150(EMBl444，l 型标记之间。这些结果显示ess突变体是一新的突变体，可能代表了花药发育的 lII 复丑大学博I‘论文 拟南芥eSS突变体定位克隧及遗传分析 l基因注释显示该 一个调节途径。此侯选区蚓包括24个基因，其中ATI906710 基因同矮牵牛育性恢复基因具有一定的同源性。通过Ler和ess测序比较发现e