抗人血栓调节蛋白单克隆抗体的制备和初步应用研究.pdfVIP

中 文摘要 目的：建立稳定表达人血栓调节蛋白(hTM)的克隆细胞株，制备抗hTM单克 提纯后经1lpofectami blottj 为免疫原，免疫Balb／c雌性小鼠，按常规方法融合并经CELISA法筛选，制各稳定分 泌抗人血栓调节蛋白McAb的克隆细胞株，并对McAb的亚类、免疫活性、细胞与组织 特异性及识别抗原特异性进行鉴定。(3)收集动脉粥样硬化病人血标本，将抗人血栓 调节蛋白Mchb应用于Western 量最高，阳性细胞百分率与平均荧光强度分别为89．00％和9．84。(2)成功制备了抗 人血栓调节蛋白～IcAb，命名为N卜1。琼脂糖免疫双扩散法鉴定NH一1的重链为IgGl 正常人外周红细胞、白细胞、未活化血小板呈阴性反应。ABC免疫组织化学法检测正 常入组织切片显示其该抗体除与子宫和前列腺有交叉反应外，与小肠、胸腺、辟、甲 状腺、胆囊、卵巢、膀胱、肝脏、肾脏、胃等组织呈阴性反应，各组织中的血管内皮 细胞均有hTM表达。Westernblotting分析显示McAbNit—l可特异地识别还原条件 NH一1可用于Westernblotting 下相对分子量为105KD左右的蛋白多肽。(3)McAb 检测动脉粥样硬化病人的sTM水平。结论：(1)获得了稳定、高效表达hTM的克隆 性的抗人血栓调节蛋白^ltcAbNH—l，并成功用于动脉粥样硬化病人sTM水平的Western blotting检测。 关键词：血栓调节蛋白单克隆抗体稳定表达鉴定应用 and icationofMonocIonaI Preparation appI Antibody i nst I Aga humanthrombomodui n Abstract i VOToobtainstab]e ofhumanthrombomoduli n inCHOand Object expression to moneclonal humanthrombomodulin，which prepare antibody(McAb)against establishabaseforvascularendothelJam helps injury． Methods(1)Recombinant wastransfectedintoCHO expressionplasmidpTbr402 cellSlineswereobtained 1 andstable hTMclonal byipofectamineexpressing after withG418．hTM inClIOwasidentifiedflow selecting expression by andWestern miceobtainedactiveimmunity cytometry blotting．(2)Balb／c by CHO～TMintoabdomenandMcAbwasscreenedCELISAafternormal injecting by cell and