枯草芽孢杆菌Vlt;,1gt;J抗真菌物质生物学特性和液体发酵优化研究.pdf

责州大半 2005届硕士研究生学位论丈 枯草芽孢杆菌v。T抗真菌物质生物学特 性及液体发酵优化研究 StlldlednnBacillus subtilisV—producing and fermentationcundltluns optimizing 学科寺业：微生物学 研究方向：应用微生物 导 师：谢和副教授 研究生：吴翊民 目-啬州·费 摘要 本文研究了具有抗菌作用的枯草芽孢杆菌V1J菌株产生抗菌物质的条件和抗菌物质 的活性。结果表明，BPY培养基为VIJ的最适种子培养基，该种子培养基产生的菌量高， 菌体健壮，最适菌龄为20h。SDAY培养基为产抗菌物质活性最高的培养基，36h开始产 生抗菌物质，84h抗菌物质活性达到最大值。改良基础培养基由于成分简单，且活性较高 而用于发酵条件的优化研究。VlJ菌株产生抗菌物质的最适发酵条件为：30℃， A1”，Zn9，Mg“，Mn“对抗菌物质的活性有一定的促进作用。Ag‘’H91‘，Fe”，Cu2+对抗菌物质 的产生和菌的生长起抑制作用；Pb”在低于0．05肼nol／L的浓度下对于抗菌活性有一定促 进作用。低浓度的表面活性剂Tween80对V：J发酵有促进作用。 抗菌谱的研究表明，VJ产生的抗菌物质具有广谱抗菌活性，对多种丝状真菌，酵母 具有拮抗作用，对于部分革兰氏阳性菌和阴性菌也有抑制作用。 对抗菌物质的研究表明，该抗菌物质对酸碱比较稳定，最适作用pH值为6-8。在65 ℃以下抗菌物质比较稳定，而在85℃时抗菌物质活性全失。胃蛋白酶，胰蛋白酶，溶菌 酶，果胶酶，纤维素酶处理对抗菌物质的活性影响不大。草酸，EDTA，Tween80和氯仿 对抗菌物质略有影响，而甲醇，乙醇，三氯乙酸，苯酚，二甲苯，丙酮，脲，十二烷基 磺酸钠和TritonX-100对抗菌物质几乎没有影响。紫外光对抗菌物质有一定影响， 可见光对抗菌物质几乎没有影响。抗菌物质的最适作用pH为7．0。 最佳萃取有机溶剂的筛选：表明萃取效果最好的有机溶剂是正丁醇。利用酸化的处 理方法获得粗提物，通过梯度实验确定其最适酸化PH为3．5。有机溶剂对粗提物的选择 性溶解效果最好的是乙腈，而80％的甲醇溶解选择性较好。醇提物旋转蒸发，制得黄色 ug／ml，抑菌圈检测发 粉末，经检测发现Img／ml的醇提物水溶液中蛋白质含量约4．9508 现其含量与抑菌圈大小星正相关。 关键词：枯草芽孢杆菌；抗真菌：抗菌物质；生物防治；发酵优化 Abstract Thestrain of Bacillus wasisolatedfrom VJ subtilis，which tobaccowithbroad studied．TheresultsshowthatBPYmediumisthe antibiogram，was seedmediumfor optimal cellnumberandSDAYmediumisthe medium．The producingnigher optimal fermenting