柞蚕14-3-3蛋白基因的克隆及表达分析.pdfVIP

摘要 摘要 摘摘要要 14-3-3蛋白是一类含量丰富的高度保守的酸性蛋白质,存在于真核生物细胞 中.14-3-3蛋白是Moored等在分离牛脑蛋白的过程中发现的，后来陆续在许多真核 生物中发现。14-3-3蛋白参与细胞的许多生命活动，在细胞中具有重要功能，主要 在信号转导、细胞周期、细胞凋亡、酶活性调节等过程中具有重要功能。 柞蚕是一种野生绢丝昆虫，属于鳞翅目、大蚕蛾科、柞蚕属。除了作为纺织 工业原料外，还有很高的药用和食用等经济价值。本研究利用分子生物学和生物 信息学方法对柞蚕14-3-3蛋白进行研究，获得的主要结果如下： 1、采用RT-PCR和RACE-PCR方法克隆获得了该蛋白的全长序列，14-3-3蛋白 1220bp,ORF 744bp, 247 28.1KDa 4.9 全长 为 编码 个氨基酸，分子量大小为 和等电点为 。 2、采用RT-PCR法扩增了柞蚕14-3-3蛋白的ORF，并连接至PET-28a(+)表达载 体，转入大肠杆菌BL21（DE3）菌株中，用IPTG进行了不同浓度的诱导表达，经 SDS电泳和Westernblot检测，被诱导的目的蛋白均得到了稳定的表达，进一 步利用亲和柱层析纯化该重组蛋白，这为以后对14-3-3蛋白的真核表达及其功能的 研究提供了参考。 关键词：柞蚕、14-3-3蛋白、克隆、原核表达 Abstract Abstract AAbbssttrraacctt 14-3-3 protein is a kind of rich content of highly conserved acidic protein, exists in eukaryotic cells. The 14-3-3 protein is found in the process of Moored isolated from bovine brain protein in succession, and later found in many eukaryotes.the 14-3-3 protein involved in Many of cells life activities, has important function in the cell,Mainly in the proteins consist in eukaryotic cells.14-3-3 proteins first is Moored, etc the signal transduction, cell cycle, apoptosis, enzyme activity, etc have important functionintheprocess ofadjustment. Antheraea pernyi is a kind of is developing wild ilk-producting insect, which belongs to the Lepidoptera Saturniidae Antheraea . In addition to as raw materials for the textile industry, there are high medicinal and edible economical values.Using the method of molecular biology and bioinformatics study of tussah 14-3-3 protein, The majorresultsaresummarizedasfollows: 1、ThecDNAsequenceof14-3-3 protein, 1220 bp inlenth,an open reading frame of 744 bp, e