目的基因与运载体结合步骤.ppt

* 溧阳市埭头中学 孙定川 随着社会的发展，人们的需求越来越趋于多样化，人们希望按照自己的意图改变物种的基因，以期获得新的性状、得到新的生物产品。经典遗传学主要通过自然选育来挑选已发生自发突变的新变种；通过用物化因子（如辐射、药物处理等）来进行人工诱变，得到所需的性状；通过细胞杂交使得某种突变性状得以显现，从而寻找新类型。但所有这些，都具有相当大的偶然性，效率不高，难以真正看到基因。由于经典遗传学所研究的基因不能离开染色体而独立进行复制，所以基因拷贝数的增加是有限的；由于染色体减数分裂受同源性的支配，远缘杂交难以实现。人们强烈希望新的育种方式出现。在疾病防治方面，有许多严重威胁人类健康的病症，如遗传性疾病、心血管病、恶性肿瘤、免疫系统疾病等，病因还不太清楚。解决这些问题，必需依赖于生命科技甚至整个科学技术的革命. 在上世纪中下叶，科学进步的机遇终于到来，这就是分子生物学理论的创立和突破性进展，特别是基因工程（遗传工程）-----DNA体外重组技术的出现。 生物之所以体现出各种形态是基因表达的结果，各种生物间的性状千差万别这是为什么呢？ 问题： 例： 1．青霉菌能产生对人类有用的抗生素——青霉素。2．豆科植物的根瘤菌能够固定空气中的氮气。3．人的胰岛B细胞能分泌胰岛素调节血糖的浓度。 小结：这些性状都是基因特异性表达的结果 人类能不能改造基因呢？能不能使本身没有某个性状的生物具有某个特定性状呢？ 问题 ： 标准概念：在生物体外，通过对DNA分子进行人工“切割”和 “拼接”，对生物的基因进行改造和重新组合，然后导入受体细胞 内进行无性繁殖，使重组基因在受体细胞内表达，产生出人类所 需要的基因产物。 因此，基因工程又叫做基因拼接技术或DNA重组技术 一、基因工程的概念 通俗概念：按照人们的意愿，把一种生物的个别基因复制出来 加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物 的遗传性状。 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 基因工程的别名 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切 拼接 导入 表达 人类需要的基因产物 一、基因工程的基本内容 基因工程，兴起于20世纪70年代。人类实现对基因进行自如地操作、转移和改造的理想，是在核酸限制性内切酶、载体质粒、连接酶和其它修饰酶被陆续发现以后。在此基础上，核酸和蛋白质序列测定、基因体外快速突变、DNA的人工合成等，则使得基因工程逐渐成熟和发展。 通过对基因工程概念的理解，我们知道其操作水平是在DNA分子水平，用普通的操作工具能够在如此微观的条件下操作吗？ 问题： 基因操作的工具 苏云金芽孢杆菌（有抗虫特性） 抗虫基因 普通棉花（无抗虫特性） 棉花细胞（含抗虫基因） 导入 与运载体DNA拼接 棉花植株（有抗虫特性） 关键步骤一：抗虫基因从苏云金芽孢杆菌细胞内提取 关键步骤二：抗虫基因与运载体DNA连接 关键步骤三：抗虫基因进入棉细胞 关键步骤一的工具：基因的剪刀——限制性内切酶 关键步骤二的工具：基因的针线——DNA连接酶 关键步骤三的工具：基因的运输工具——运载体 思考：关键步骤是什么？（难题） ①分布： ②作用特点： ③结果：④举例： 主要在微生物中。 特异性。一种限制酶只能识别一种特定核苷酸序列，在特定的切点上切割DNA分子。 产生黏性未端（碱基互补配对）。 大肠杆菌的一种限制酶能识别GAATTC序列， 并在G和A之间切开。 ?思考题：要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？ 可产生几个黏性未端？ （1）基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） 限制酶切割DNA分子示意图 DNA连接酶的连接作用示意图 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，它们之间正好互补配对，这样的切口叫做黏性未端。可以设想，如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，然后让两者的黏性未端黏合起来，似乎就可以合成重组的DNA分子了。但是，实际上仅仅这样做是不够的，互补的碱基处虽然连接起来，但是这种连接只相当于把断成两截的梯子中间的氢键（踏板）连接起来，两边的扶手的断口处还没有连接起来。要把磷酸二酯键（扶手）的断口处连接起来，也就是把两条DNA未端之间的缝隙“缝合”起来，还要靠另一种极其重要的工具——DNA连接酶。 （2）基因的针线——DNA连接酶（图示） DNA连接酶的连接作用示意图 ??? ①连接的部位： ??? ②结果：??? 思考题：??? 磷酸二酯键（梯子的扶手），不是氢键（梯子的踏板）。 两个相同的黏性未端的连接。 用DNA连接酶连接两个相同的黏性未端要连接几个磷酸二酯键？?用限制酶切一个特定基因要切断几个磷酸二酯键？ （2）