蜂毒素-SP94融合蛋白原核表达载体的构建、表达和其纯化.pdfVIP

PROKARYOTICVECTOR AND PURIFICATIoNoFTHE FUSIONPROTEINMELITTIN．SP94 A DissertationSubmittedto theGraduateSchoolofHenanNormal University inPartialFulfillmentofthe Requirements forthe of Degree MasterofScience By Cao Jing Supervisor：Prof．ZhangHong-Xu April，2010 IIII II㈣III 蚴蝴㈣I Jill㈣IIIIIII Y1 7341828。 摘要 肝癌是我国最常见的恶性肿瘤之一，目前的治疗手段主要采用放疗、化疗和手术， 但放疗和化疗在杀伤恶性细胞时对正常细胞也造成了严重损害。靶向治疗则使分子药物 特异性结合到肿瘤细胞的某些作用位点，选择性杀死肿瘤细胞而不杀伤或仅很少损伤正 常组织与细胞，克服了传统治疗存在的弊端，因而肝癌的靶向治疗近年来成为研究热点。 蜂毒素是一类存在于蜜蜂毒中的抗菌肽，由26个氨基酸组成，具有抗炎、抗关节 炎、抗菌、抗病毒等方面的作用，单独使用时有毒性，为达到减毒增效的目的，本实验 选择蜂毒素和可以特异性结合到肿瘤细胞表面的靶向头SP94连接形成融合蛋白，根据 大肠杆菌密码子偏好性改造碱基序列，其中加入限制性内切酶KpnI和XhoI，以便构建 重组载体pET32a．蜂毒素．SP94，然后原核表达融合基因，制备出纯化的融合蛋白，为肝 癌的靶向治疗研究与临床应用提供新的思路。 和层析、透析除盐、肠激酶酶切后，进行冷冻干燥，制备出纯化的融合蛋白。 ．SP94重组载体在大肠杆菌中高效表达，得到较理想的可溶性蛋白，重组蛋白约占细胞 总蛋白的30％，超声破碎后50％的重组蛋白以可溶性形式存在。SDS．PAGE分析显示重 组蛋白大小与预期理论值一致，纯化酶切后获得高纯度蜂毒素．SP94蛋白。因此，PET32a- 蜂毒素．SP94重组载体可以用于融合蛋白蜂毒素．SP94的规模制备，为肝癌的靶向治疗提 供新的候选药物蛋白。 关键词：蜂毒素．SP94，融合蛋白，载体构建，表达，纯化 ABSTRACT Livercancerisoneofthemostcommon tumorsin malignantChina．Thecurrenttreatmentsare mainly and and Can the radiotherapy,chemothe