ASCL2基因在体细胞克隆牛和自然繁殖牛肺脏中的甲基化分析.pdfVIP

中国畜牧兽医 2014年第41卷第8期 生物技术 ·71· ASCL2基因在体细胞克隆牛和自然繁殖 牛肺脏中的甲基化分析 王梦楠1，张明月1，李宁2，李世杰1 (1．河北农业大学生命科学学院，河北保定071001；2．中国农业大学农业生物技术国家重点实验室，北京100193) 摘要：为探讨ASCL2基因在体细胞克隆牛中的重编程状态，本研究通过亚硫酸氢盐测序法(BSP)对体细胞克隆牛和自然 繁殖牛肺脏中ASCL2基因启动子区CpG岛上的CpG位点进行了甲基化状态分析。结果显示，体细胞克隆牛的甲基化水平 肺脏发育异常的原因之一。 关键词：ASCL2；重编程；体细胞克隆牛；BSP；DNA甲基化；器官缺陷 中图分类号：Q813 文献标识码：A 文章编号：1671—7236(2014)08—0071—05 体细胞核移植技术在加速家畜遗传改良、医药 工业、治疗性克隆及对濒危动物的拯救方面有着重 要的意义。然而克隆效率低下及克隆动物在围产期 死亡(Li等，2005)或表型发育异常等问题(Farin环螺旋结构的转录因子，在胚胎发育的早期具有 等，2004)严重制约了克隆技术的发展和应用，而供刺激单层滋养层细胞增殖和抑制双核细胞形成的功 体核的不完全或异常重编程是导致体细胞核移植效 能。ASCL2的表达缺失会导致成胶质细胞缺失及 率低下的主要原因(Daniels等，2000)。印记基因是 绒毛膜发育障碍，从而导致胎儿早期在子宫内死亡 由等位基因表观遗传修饰的不对称导致的基因表达 具有亲本选择性(Khatib等，2007)，包括DNA甲基 异甲基化区(differentiallymethylatedregion， 化、组蛋白乙酰化及组蛋白甲基化(Xin等，2001)等 DMR)，DNA甲基化作为一种重要的可遗传的后成 表观修饰。大部分印记基因与哺乳动物的发育相 修饰，改变了蛋白因子如转录因子与DNA的结合， 关，尤其是胚胎、胎盘的生长发育(Reik等，2001)。 从而改变了基因的表达状态(Wol“e，2000)。研究 在人、小鼠和牛中，ASCL2是1个母源表达的印记 发现，多数新生死亡的体细胞克隆牛表现出肺脏发 基因，在早期胚胎和胎盘发育中起重要作用。 育异常(Li等，2005)。因此，本试验利用亚硫酸氢 ASCL2基因位于小鼠7号染色体末梢Cdknl／Kc— 盐测序法(BSP)对出生48h内死亡的克隆牛和正 nqlotl印记区域内(Oh—McGinnis等，2011)，该印 常对照牛肺脏组织的印记基因ASCL2启动子区 记区域位于人11号染色体(Zhang等，2005)和牛 DNA甲基化状态进行分析，以揭示ASCL2基因 29号染色体，与伯一韦综合征(beckwith—wiede— DNA甲基化修饰的重编程与体细胞克隆动物肺脏 mann syndrome，BWS)和癌症有关(Higashimoto 发育异常及新生死亡的关系。 等，2006)。在Cdknl／Kcnqlotl印记区域内中，至 1材料与方法 少包括8个母源表达的蛋白编码基因(Ascl2、 1．1 试验动物与样品采集 体细胞克隆牛的细胞 Tssc4、Cd81、Kcnql、Cdknlc、Slc22