miR-125a-5p在大鼠终板软骨细胞自然退变中的表达及其靶基因预测.pdfVIP

第 33 卷 第 3 期（上） 赤 峰 学 院 学 报（自 然 科 学 版 ） Vol. 33 No.3 2017 年 3 月 Journal of Chifeng University （Natural Science Edition ） Mar. 2017 miR-125a-5p 在大鼠终板软骨细胞自然退变中的 表达及其靶基因预测 徐永明 1 ， 徐宏光 1 ， 张晓玲 2 ， 高 智 1 ， 肖 良 1 （1.皖南医学院第一附属医院弋矶山医院脊柱外科 ， 安徽 芜湖 241001 ； 2. 中国科学院上海生命科学院骨科细胞与分子生物学实验室 ， 上 海 200025 ） 摘 要 ： 目的：通过建立体外大鼠终板软骨细胞自然退变模型 ，探讨 miR-125a-5p 在 自然传代诱导大鼠终板软骨细胞退 变中的表达 ，通过生物信息学软件预测相关靶基因 .方 法 ：取大鼠原代终板软骨细胞 ，应用胰酶消化法和自然传代法培养终板 软骨细胞 ，分别选取 P2 、P5 、P8 代细胞进行甲苯胺蓝及阿辛蓝染色观察细胞形态改变 .qRT-PCR 检 测终板软骨细胞中 miR- 125a-5p 表 达情况 ，通过生物信息学软件预测相关靶基因 .结 果 ：细胞传到 P5 代时细胞由多角形变成长梭形 ，外基质分泌减 少 ，细胞形态发生退变改变 ， -PCR 检 测结果显示 -125a-5p 表达含量随细胞代数增加逐渐减少 结论 ：大鼠终板软 qRT miR . 骨细胞自然传代至 代出现退变改变 ， 25a-5p 与终板软骨退变有密切联系 P5 miR-1 . 关键词 ： 25a-5p ；终板软骨细胞 ；软骨退变 miR-1 中图分类号 ：R-332 文献标识码 ：A 文章编号 ：1673-260X（2017 ）03-0039-03 随着人口结构老龄化 ， 脊柱退行性疾病发病率不断上 液 、胎牛血清 、青 - 链霉 素双抗溶液 100×（Gibico;美国 ）； 升，越来越多人们长期被颈腰痛所折磨，在引起颈腰痛诸多 DMEM/F12 培养液（Hyclone;美国 ）；甲苯胺蓝染色试剂盒、阿 因素中椎间盘退变被视为最为重要因素之一[1].尽管目前在 辛蓝染色试剂盒 （碧云天生物技术研究所; 中国）；细胞计数 临床中可采取药物、理疗、手术等多种治疗手段，但是临床 仪 、Trizol 试 剂 （Invitrogen; 美 国 ）；Realtime PCR 试 剂 盒 疗效往往无法令患者达到满意的效果 ， 也无法从根本上去 （takara;大连 ）；实时逆转录聚合酶链反应仪 （RocheLightCy- 预防和阻止椎间盘退变进一步发展.终板软骨是构成椎间盘 cler480;德国 ）；倒置荧光显微镜（Leica;德国 ）. 一重要结构，是椎间盘营养获得主要途径 ，终板软骨退变进 1.2 方法 一步导致椎间盘退变， 相反通过保护终板软骨可以有效延 1.2.1 大鼠原代终板软骨细胞的获取和培养 缓椎间盘退变的发生[2,3] ，因此对终板软骨相关病理生理研 10 只 SD 级大鼠按 500mg/kg 药物量腹腔 注射浓度 为 究意义十分重要. 4%水合氯醛处死 ，常规消毒后在超净台 内取出整段腰椎，用 MicroRNA （miRNA ） 是一类内源性表达， 非编码小 组织剪剔除腰椎 附属的肌肉 、韧带 、软