过量氟引起成骨细胞内质网应激信号通路的基因差异表达.pdfVIP

重庆 医学 2Ol4年 11月第 43卷第33期 4425 · 论 著 · do~：10．3969／]．issn．1671—8348．2014．33．003 过量氟引起成骨细胞 内质网应激信号通路的基因差异表达 张亚楼 ，孙小娜。，冯树梅 ，李 甜 ，廖礼彬 ，白生宾 ，钟近洁 △ (1．新疆医科大学基础医学院组织胚胎学教研室，乌鲁木齐 830011； 2．新疆维吾尔 自治区疾病预防控制 中心放射卫生科 ，乌鲁木齐 830001) 摘 要 ：目的 观察人成骨细胞在过量氟作用下未折叠蛋 白反应 (UPR)信号通路 的差异基 因表达 ，探索在氟中毒条件下成 骨细胞 内质 网应激 的作用。方法 体外培养人成骨细胞染氟模型，用不 同浓度 的氟干预 24h后 MTS法检测细胞存活率和流式 细胞仪检测细胞凋亡百分率，用 UPR信号通路 PCRArray芯片检测通路 中相关基 因表达的情况，并用蛋 白免疫 印迹法(Western blot)检测 蛋 白表 达。结果 在氟化钠浓度为 0、5、10、20、40、80mg／L时，细胞存 活率分别为 (100．6785±2．8303) 、 (105．3934±2．5384) 、(106．1257±2．0483) 、(77 9773±2．5443) (与对照组 比较 Pd0．05)、(30．2377±0．6327) (与 对 照组 比较 P0．05)。流式细胞仪检测 ，凋 亡率分别 为 5mg／L组 4．8 ，10mg／L组 l3．8 ，2Orng／L组 37．0 ，40mg／L组 58．9 ，80rag／L组 63．2 (P％0．05)。PCR芯片检测发现 1个基 因表达下调 ，14个基 因表达上调 。Westernblot结果显示， BIP、ATF4、CHOP、IRE1均呈现 出不 同程度的随氟剂量增加蛋 白表达逐渐上调。XBP1在 NaF5～2Omg／L表达逐渐增强，在 4o 与8Omg／L时表达减弱 。结论 氟化钠可以通过 PERK和 IRE1途径 引起成骨细胞 内质 网应激 ，并且可以引起成骨细胞凋亡。 关键词 ：成骨细胞 ；未折叠蛋 白反应；PCR芯片 中图分类号 ：R123 文献标识码 ：A 文章编号 ：167l_8348(2014)334425-03 Genesdifferentiallyexpression ofendoplasmicreticulum stresssignalingpathwaycaused byexcessfluoridein osteoblasts ZhangYalou ，SunXiaona ，FengShumei，LiTian ，LiaoLibin ，BaiShengbin ，ZhongJinjie (1．DepartmentofhistologyandembryologyofPreclinicalInstitute，XinjiangMedicalUniversity，Urumqi， Xinjiang830011，China；2．DepartmentofRadiationDiseaseProtectionandRadiationHygiene， XinjiangUyghurAutonomousRegionCentergorDiseaseControlandPrevention，Urumqi，Xinjiang830001，China) Abstract：Objective Toobservegenedifferentexpressionofunfoldedproteinresponsesignalingpathwayinhumanosteoblasts undertheexcessivefluoride，andexploretheroleofendoplasmicreticulum stressinfluorosis．Methods Humanosteoblastswere culturedwithfluoride，interveningfor24h．CellviabilityandapoptosiswereinspectedbyMTSassaya