拉莫三嗪及乙琥胺对颞叶癫痫神经可塑性实验探究.doc

拉莫三嗪及乙琥胺对颞叶癫痫神经可塑性实验探究摘要：目的 探讨拉莫三嗪和乙琥胺对匹罗卡品诱导颞叶癫痫模型的行为学、脑电图以及苔藓纤维发芽的影响。方法 使用氯化锂匹罗卡品制作慢性癫痫模型，随机分为6组，正常组，模型组，拉莫三嗪低高、低剂量组，乙琥胺低、高剂量组，通过对各组进行行为学观察，脑电图记录，苔藓纤维发芽的方法评价两种药物对匹罗卡品诱导的颞叶癫痫的预防作用。结果 拉莫三嗪高、低剂量组可以有效地减少自发性癫痫发作次数，改善慢性期脑电图表现（减少尖波、棘波的频率和降低痫性波的波幅），抑制苔藓纤维的发芽。拉莫三嗪各组与模型组相比，差异有统计学意义（P0.05)，高、低剂量组间比较差异也无统计学意义(P0.05)。结论 拉莫三嗪可以预防匹罗卡品诱导的颞叶癫痫发生，减少慢性期自发性癫痫发作次数，改善脑电图，抑制苔藓纤维发芽；乙琥胺不能预防匹罗卡品诱导的颞叶癫痫发生，不能减少慢性期自发性癫痫发作次数，不能改善脑电图以及抑制苔藓纤维发芽。 关键词：匹罗卡品；颞叶癫痫；拉莫三嗪；乙琥胺；自发性癫痫反复发作；脑电图；苔藓纤维发芽 中图分类号：R742.1 R255.2 文献标识码：A 文章编号2012 颞叶癫痫为成年难治性癫痫的主要类型，氯化锂匹罗卡品诱导的颞叶癫痫模型成功的复制了人类复杂部分性发作，通过注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态(status epilepticus,SE)形成，15 d后大鼠出现自发性癫痫反复发作（spontaneous recurrent epileptic seizure，SRS）现象，这是一个成熟的慢性癫痫模型［1］。拉莫三嗪（lamotrigine,LTG）现已广泛用于难治性癫痫的治疗，但在此模型上的实验研究目前尚无相关文献报道。乙琥胺（ethosuximide ,ESX）是失神性癫痫的首选用药， Leite等［2］在此模型上使用ESX，发现ESX不能减少慢性期大鼠自发性癫痫反复发作的次数，但并没有进一步观察脑电图和病理学变化。本实验通过行为学、脑电图、病理学等方面来评价LTG和ESX对该模型的作用，进一步为LTG 的临床治疗提供理论依据，并探索ESX对此模型的脑电影响和神经可塑性改变。 1 材料与方法 1.1 实验动物 成年雌性SD大鼠50只，体重180 g～220 g，由山西医科大学动物中心提供，实验动物均以标准饲料喂养,自由摄食饮水,自然光照射,换气扇通风。 1.2 慢性癫痫模型制备 成年雌性SD大鼠，氯化锂3 mmol/kg腹腔注射，18 h～24 h后首剂腹腔注射匹罗卡品30 mg/kg，30 min后如无Ⅳ级以上发作，可每隔15 min注射10 mg/kg追加剂量，直至出现Ⅳ级以上无明显间歇的SE。实验动物痫性发作分级评价标准采用Racine(1972年)分级标准［3］选取发作级别为Ⅳ级或Ⅳ级以上者，SE持续60 min后注射地西泮10 mg/kg终止发作,终止发作后存活者视为造模成功。造模后大鼠于15 d后会出现自发性癫痫反复发作（spontaneous recurrent epileptic seizure，SRS）。 1.3 实验分组 随机分为模型组、正常对照组、LTG低剂量组、LTG高剂量组、ESX低剂量组、ESX高剂量组6组。模型组：使用氯化锂匹罗卡品按上述方法进行造模，造模后无药物干预；正常对照组：以相同体积的0.9％氯化钠取代氯化锂、匹罗卡品、地西泮腹腔注射，无药物干预；LTG低剂量组：造模后24 h以内给予拉莫三嗪10 mg/kg灌胃，每天2次，连续7 d给药；LTG高剂量组：造模后24 h以内给予拉莫三嗪20 mg/kg,每天2次；ESX低剂量组：造模后24 h以内给予乙琥胺25 mg/kg腹腔注射，每天2次，连续7 d给药；ESX高剂量组：造模后24 h以内给予乙琥胺50 mg/kg,每天2次。 1.4 方法 1.4.1 行为学观察 采用视屏监测大鼠24 h活动，记录大鼠出现SRS后4周的癫痫发作情况（发作强度和发作次数）。 1.4.2 脑电图采集 分别记录致痫后30 d的脑电图，将大鼠用25%乌拉坦麻醉，使其处于半清醒状态，固定于脑立体定位仪上，定位在海马（矢状缝旁2 mm,冠状缝后4 mm，骨膜下5 mm），用BL420F型电生理信号采集仪描记脑电活动。记录尖波，棘波，尖、棘慢复合波等痫性波的频率及波幅。 1.4.3 Timm 组织化学染色 SE后30 d，10%水合氯醛麻醉大鼠，经左心室分别迅速灌注生理盐水100 mL、0.4%硫化钠缓 冲液150 mL、4%多聚甲醛400 mL，之后断头取脑，以4%多聚甲醛固定4 h～6 h，30%蔗糖4 ℃浸泡过夜,行恒温冷冻冠状切片，切片厚度30 μm