铜绿假单胞菌pvdQ基因在肠道上皮细胞Caco-2中的表达及其功能研究.pdfVIP

第 39卷第 5期第 649页 华 中科技 大学学报 (医学版) Vo1．39 No．5 P．649 2010年 1O月 ActaM edUnivSciTechnolHuazhong 0ct． 2O10 铜绿假单胞菌 pvdQ基 因在肠道上皮细胞 Caco一2 中的表达及其功能研究* 叶 露， 李洪涛， 王丽丽 ， 邢铭友 ， 宋建新△ 华 中科技大学同济医学院附属同济医院感染科 ，武汉 430030 摘要 ：目的 探讨铜绿假单胞菌 pvdQ基 因阻止密度感应系统 自体诱导因子 30-oxo—C -HSL干扰肠道上皮细胞 Caco一2的作用 。方法 构建带有 FLAG标签 的pvdQ基 因真核表达质粒 plRES2一EGFP—pvdQ并鉴定，将带有 pvdQ基 因的质粒转染人 Caeo一2细胞 ，并用 Westernblot法检测 pvdQ基因在 Caco一2细胞 中的表达。30一OXO—C HSI干扰转染 前后 的Caco一2细胞 ，利用质谱分析仪检测 Caco一2细胞上清 中 30一OXO—c 一HSL浓度变化。结果 经酶切鉴定 pvdQ基 因真核表达载体构建成功 ，Westernblot检测结果显示 pvdQ基 因能在人肠道上皮细胞 Caeo一2中表达 。质谱分析结果显 示 ，转染 pvdQ基 因后 ，Caco一2细胞上清 中 30一OXO—C。一HSL浓度 明显减少 (PO．05)。结论 pvdQ基 因成功在人肠道 上皮细胞 Caco一2中表达 ，并降解细胞周 围3(~oxo—Cz-HSL分子 ，为进一步研究 pvdQ基因对 Caco-2细胞的保护作用奠 定基础 。 关键词 ：pvdQ基 因； 30一oxo-Cl2一HSI； 密度感应系统 ； Caco一2细胞 中图分类号 ：R379．9 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2O10．05．015 Expression ofPseudomonasaeruginosa pvdQGeneinIntestinalEpithelial CellsCaco-2andItsFunction YeLu，LiHongtao，W ang Lilietal DepartmentofInfectiousDiseases，TongJiHospital，TongJiMedicalCollege， HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China Abstract Objective ToresistthepathogenicityofPseudomonasaeruginosa bytransfectinghumanintestinalepithelial Caco一2cellswithpvdQ gene．Methods ThepvdQ geneeukaryoticexpressionplasmidcarryingFLAG(pIRES2一EGFP-pvdQ) wasconstructedandidentified，andthentransfectedintoCaco一2cells．TheexpressionofpvdQgeneinCaco一2cellswasdetected byW esternblot．Thecellsbeforeand aftertransfection wereincubatedwith30一oxo—C12一HSL andthecontentof3()-OXO—C】2一 HSL inthesupernatantwasdeterminedbythemethodofmasschromatographicanalysis．Results ThepvdQ geneeukaryotic expressionplasmidwasconstructedsuccessfully．TheW esternblotrevealedthatpvdQ