红树dna导入茄子获得耐盐性后代的研究3.pdfVIP

《生物工程进展》2001 ,Vol . 21 ,No . 5 研究报告 红树 DNA 导入茄子获得耐盐性后代的研究 　　 　　　　　　林栖凤 　邓用川 　黄 　薇 　陈菊培 　李冠一 (海南大学生物科学技术研究所 ,海口　570228) 　　　　　　 摘要 　将海滩耐盐植物红树 DNA 经花粉管通道导入茄子 ,其后代在海滩试种 ,用海水直接浇灌 ,筛 选出耐盐性转化株 ,约 90 %能开花结果 ,完成生长周期 ,并对其在盐胁迫下的生长情况 、蒸腾速率 、 光合速率 、磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶酶活以及叶片气孔的电镜观察等进行了研究 。实验结果表 明 ,通过花粉管通道导入红树 DNA 培育的茄子 ,其耐盐能力明显增强 。 关键词 　耐盐性 　红树 　茄子 　外源 DNA 导入 　　土壤盐渍化是影响农业生产和生态环境的严重 12 　方法 因素之一 。在人口不断增加 ,耕地 日趋减少和淡水 121 　红树 DNA 的提取 资源不足的压力下 ,培育适于盐碱地种植 ,并能耐受 按照本实验室建立的CTAB (十六烷基三甲基溴 海水浇灌或海水浸渍的耐盐作物品种 ,是开发利用 ) [2 ] 化铵 方法 进行 。将红树叶片加液氮研碎 ,用巯基 大面积盐碱和滩涂地的重要课题 ,也是未来农业所 乙 醇CTAB 缓冲液提取 ,65 ℃恒温 ,氯仿辛醇抽提 面临的一个重要课题 。基因工程育种可以打破物种 2～3 次 ,最后在 1molL NaCl 高盐条件下加入异丙醇 间遗传物质横向转移的屏障 ,为难度较大的作物耐 沉淀 , 经乙醇洗涤 、干燥 ,制得的 DNA 紫外检测其 盐性改良开辟了更直接 、有效的途径 。我们 曾报道 A260 A280 ≥18 ,分子量约 50kb ,符合分子育种要求 。 运用花粉管通道技术将外源盐生植物的总 DNA 直 122 　外源 DNA 导入茄子的方法 接导入辣椒 ,其耐盐性明显增强 , 并进行了蛋 白质 [3 ] 基本上按周光宇的方法 进行 。在茄子 自花授 SDSPA GE 电泳和 RAPD 分析[ 1] 。本文报道红树总 粉或人工授粉后 10～24 小时选择子房发育良好的、 DNA 导入普通茄子 ,对其后代在盐胁条件下的生长 花柱长的花 ,切去柱头 ,将外源 DNA 滴于切 口处 ,使 情况 、蒸腾速率 、光合作用 、呼吸和气孔开闭 , 以及磷 其沿着已形成的花粉管通道进入胚囊 ,转化受精细 ( ) 酸烯醇式丙酮酸羧化酶 PEPCase 酶活等一系列生 胞或胚细胞 , 自然发育成种子 。外源 DNA 的浓度为 理指标变化的研究 ,表明茄子的耐盐性增强与外源 05mgml ,并用 TrisEDTA ( 10mmolL TrisHCl , 1mmol 红树 DNA 的导入有关 。 L EDTA ,p H80) 溶液作对照 。 1 　材料和方法