幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备.docVIP

　　幽门螺杆菌Ⅳ型分泌系统cagM基因的克隆、表达及抗体制备 ：田树伟， 邵世和， 韩军， 黄河， 黄世腾 【摘要】 　　目的： 构建表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori) NCTC 11637 IV型分泌系统cagM(HP0537)全长编码基因的原核表达载体，分析其抗原性并制备抗体。方法： 应用PCR技术从H.pylori基因组扩增 cagM基因片段,TA克隆后测序分析，并构建表达载体pET28a(+)cagM,转化 E.coli BL21，IPTG诱导表达，SDSPAGE及鉴定表达蛋白，表达蛋白以 Ni2+NTA 柱进行纯化，用软件分析其抗原性后，免疫家兔制备多克隆抗体，ELISA检测多克隆抗体效价。结果： 测序结果表明cagM基因全长1 131 bp(基因库登录号为GU269568)，编码376个氨基酸，与基因库中已知菌株J99，26695和G27的氨基酸同源性为98%～99%；诱导表达后经SDSPAGE检测表明，在43 700处发现一条新生条带，Ni2+NTA柱纯化后为单一条带，软件分析表明其抗原性较强，免疫家兔制备的多克隆抗体效价为1∶1.6×105。结论: 首次成功克隆并表达了H.pylori pNCTC 11637 cagM基因，并制备了其抗体，为以后进一步研究其生物学功能以及H.pylori相关疾病的检测与 治疗 奠定了基础。 【关键词】 幽门螺杆菌； Ⅳ型分泌系统； cagM基因； 抗体 　　Cloning and expression cagM gene of Helicobacter pylori type Ⅳ secretion　system and antibody preparation 　　TIAN Shuent of Microbiology, School of Medical Science and Laboratory Medicine, Jiangsu University, Zhenjiang Jiangsu 212013, China) 　　［Abstract］ Objective: To construct prokaryotic expression vector for expressing cagM(HP0537) of Helicobacter pylori(H.pylori) NCTC 11637 of Ⅳ type secretion system, to analyze its antigenicity and to produce antibodies. Methods： PCR technology plify cagM from the H.pylori genome. Then TA cloning ed it to E.coli BL21. IPTG n for purification, used softmunization of rabbits. At last, ELISA ber: GU269568), encoding 376 amino acids. pared ino acid homology n purified e successfully cloned and expressed the H.pylori NCTC 11637 cagM genes, and prepared its antibody, ent of Helicobacter pylorirelated diseases research in the future. 　　［Key ； cagM gene； antibody 　　幽门螺杆菌(Helicobacter pylori, H.pylori)是一种定植于人类胃黏膜的螺旋状、革兰阴性微需氧菌，现已证实H.pylori感染是慢性胃炎和消化性溃疡的重要病因［1,2］，Ⅰ型H.pylori基因组中有一个约40 kb的基因片段，即cag致病岛（cagPAI），其编码一些毒素蛋白和一个分泌装置，即Ⅳ型分泌系统（type IV secretion system, TFSS），TFSS形成一个跨膜通道，通过转运相关毒素如毒力蛋白CagA参与细胞信号调节，从而导致一系列病变，如胃炎、胃溃疡和胃癌等［3,4］。有研究发现cagM是Ⅳ型分泌系统的重要基因，对转运CagA和刺激上皮细胞产生炎症因子IL8非常重要［5,6］。但是，关于CagM在Ⅳ型分泌系统中的作用及在幽门螺杆菌致病过程中的作用尚未见报道。本文针对这一现状，首次克隆表达了H.pylori NCTC 11637 cagM基因全序列，并用生物信息学方法分析了其抗原性，制备了其抗体，为进一步研究其功能奠定了