春柴胡总黄酮含量及HPLC指纹图谱研究.docVIP

　　春柴胡总黄酮含量及HPLC指纹图谱研究 ：李静， 王博， 张磊， 潘璐琳， 赵明， 欧阳臻 【摘要】 目的： 建立春柴胡总黄酮含量分析方法及黄酮类成分的高效液相色谱指纹图谱。方法： 采用可见分光光度法测定总黄酮的含量，采用高效液相色谱法对不同采收期及不同部位春柴胡中黄酮类成分进行分析，建立春柴胡的指纹图谱。结果： 4月到5月采收的春柴胡黄酮含量较高；总黄酮含量为叶＞全草＞茎＞根。应用“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”生成了春柴胡药材的共有模式图，共有12个共有峰，各共有峰之间分离度较好，精密度、重复性和稳定性试验中各共有峰相对保留时间和相对峰面积的RSD均小于3%，符合指纹图谱要求。结论： 不同采收期和不同药用部位春柴胡的黄酮类成分差异显著，本研究为春柴胡资源的综合利用开发提供了 科学 依据。 【关键词】 高效液相色谱； 指纹图谱； 总黄酮； 春柴胡 ［Abstract］ Objective: To establish the method of total flavonoids and HPLC fingerprint in Bupleurum scorzonerifolium ethods： The content of flavonoids ined etry，The HPLC atogram of different collection period and parts,The fingerprint of Bupleurum scorzonerifolium ay and flavonoids content gt; root. The standard fingerprint of Bupleurum scorzonerifolium ” softon peaks existed in the fingerprint and each peak easurement ong different collection period and different parts of Bupleurum scorzonerifolium ETTLER AE240分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；台式冷冻高速离心机TGLL18K（江苏太仓华美生化仪器有限公司）。甲醇为色谱纯（江苏汉邦科技有限公司），水为娃哈哈纯净水，其余试剂均为分析纯。芦丁（批号：100080-200306）、槲皮素（批号：0861-9901）、绿原酸（批号：0753-9708）、山柰素（批号：081-9003）、异鼠李素（批号：0860-0107）购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用。 1.2 春柴胡药材 春柴胡药材采集于当地，见表1，均由镇江市药品检验所张林松主任中药师鉴定，药材均为Bupleurum scorzonerifolium l锥形瓶中，精密加入70%乙醇15 ml，在60℃条件下加热回流提取3次，每次1 h，放冷，过滤，合并滤液，浓缩后用70%乙醇定容至25 ml量瓶中，即得。 1.3.2 对照品溶液的制备 称取干燥的芦丁对照品0.0140 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加适量甲醇，置水浴微热使溶解，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，即得（每1 ml中含无水芦丁0.28 mg)。 1.3.3 标准曲线绘制 分别取经显色后的对照品溶液、样品溶液，在400～800 nm波长范围内进行扫描，结果对照品溶液、样品溶液最大吸收波长均为510 nm。 取芦丁对照品溶液1,2,3,4,5,6 ml(280 μg/ml)，分别置25 ml量瓶中，加水至6 ml。加5%亚硝酸钠溶液1 ml，混匀，放置6 min。加10%硝酸铝溶液1 ml，混匀，放置6 min。加NaOH试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min，在510 nm下测定光密度D。以浓度C(μg/ml)为横坐标，光密度D为纵坐标，绘制标准曲线(D=0.0124×C-0.0145)。r=0.9999(n=6)，线性范围为11.2～67.2 μg/ml。 1.3.4 精密度试验 按照“1.3.1”项下的方法制备同一批供试液，按标准曲线制备方法显色，连续测定6次，测得光密度值的RSD为0.89%，说明仪器的精密度较好。 1.3.5 稳定性试验 按照“1.3.1”项下的方法制备同一批供试液，按标准曲线制备方法显色，分别在0,5,10,20,30,60 min测定光密度，RSD为1.90%，说明样品溶液在60 min内稳定。 1.3.6 重复性试验 按照“1.3.1”项下的方法平行制备6份供试液，按标准曲线制备方法显色，并测定光密度，RSD为2.07%，说明方法的重复性较好。 1.3.7 加样回收率试验 取已知总黄酮含量的样品6份各1 g，精密称定，