皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGFβ1mRNA表达及意义.doc

　　皮肌炎患者外周血CD4+T细胞中TGFβ1mRNA表达及意义 【摘要】 目的： 检测活动期皮肌炎(dermatomyositis，DM)患者外周血CD4+T细胞中转化生长因子β1（transforming groRNA表达显著升高，可能与皮肌炎疾病发生有关。 【关键词】 皮肌炎 CD4 T细胞 β1 ［Abstract］ Objective: To investigate the expression of transforming groRNA in CD4+ T cells of peripheral blood from the dermatomyositis (DM)patients in active stage, and explore the association creatinkinase levels. Methods： CD4+T cells from peripheral blood icrobeads，and TGFβ1 mRNA easured by reverse transcriptase polymerase chain reaction (RTPCR). Results： The expression of TGFβ1 the dermatomyositis patients than those from healthy control group (0.751±0.107 vs 0.438±0.170，Plt;0.05﹚. There RNA and serum creatinkinase levels（r=0.67，Plt;0.05﹚. Conclusion： TGFβ1 the dermatomyositis patients. TGFβ1 may play a role in the damage of DM. ［Key atomyositis；CD4+ T cells；TGFβ1 皮肌炎(dermatomyositis，DM)是一组亚急性或慢性起病、免疫介导的自身免疫性疾病, 主要表现为对称性的肢体近端无力、肌肉疼痛、肌酶明显升高，同时伴有以眶周为中心的紫红色水肿性斑、Gottron氏征等特征性皮肤损害。组织病 理学 特点为肌组织内炎细胞浸润与肌纤维坏死［1］。其病因及发病机制目前尚不完全清楚, 但近年来在皮肌炎患者受累皮肤和肌肉活检中发现大量活化的CD4+T细胞浸润，CD4+/CD8+比值为2.5［2］。转化生长因子β1（transforming groRNA的表达，同时与患者血清CK含量进行相关性分析,探讨其在皮肌炎发病机制中的作用。 1 对象与方法 1.1 研究对象　 12例活动期皮肌炎患者选自2007年6月～2008年2月江苏大学附属 医院 风湿科、皮肤科门诊及住院患者，其中男5例，女7例，年龄40～65岁，平均51.6岁。病程2个月～3年，平均2.15年。诊断依据为1975年Bohan的诊断标准［3］,剔除合并肿瘤及重叠综合征患者。以临床表现、补体降低、肌酶、血沉升高以及肌电图改变综合判断疾病的活动性。检测前,患者至少3个月内未接受糖皮质激素、免疫抑制剂或具有免疫调节作用的药物 治疗 。选用单位体检正常者为健康对照组，其中男5例，女7例，年龄41～66岁，平均51.2岁。 1.2 主要试剂与仪器 Trizol试剂(Invitrogen公司)；反转录试剂盒(Toyobo公司)；水平电泳槽(BioRad公司)；凝胶电泳图像分析仪(Syngene公司)；免疫磁珠(Miltenyi公司)。 1.3 细胞分离 收集患者和健康对照者静脉血10 ml，肝素抗凝，通过淋巴细胞分离液分离外周血单个核细胞，再采用免疫磁珠分离出CD4+T细胞，细胞纯度大于92%。 1.4 RTPCR 按常规方法提取总RNA，严格按照反转录试剂盒说明书将总RNA反转录为cDNA后-20℃贮存备用。根据基因库中公布的基因序列，通过Primer Premier 5.0 软件设计PCR特异性引物，聚合酶链反应引物由上海生物工程有限公司合成，引物序列为：βactin上游引物5′CACGAAACTACCTTCAACTCC3′，下游引物5′CATACTCCTGCTTGCTGATC3′，扩增产物262 bp；TGFβ1上游引物5′GCTCCTGTGACAGCAGGGAT3′，下游引物5′ GGCAGAAGTTGGCATGGTAG3′，扩增产物303 bp。PCR扩增条件：94℃预变性5 min，94℃变性30 s，56℃（βactin）或54℃（ TGFβ1 ）退火，72℃ 45 s，共30个循环，72℃延伸7 min。 1.5 PCR