乳糖操纵元的表现调控.PDF

乳糖操縱元的表現調控 乳糖操縱元的結構及其基因表現調控可綜合於圖3-7。 抑制蛋白的負性調控 當大腸桿菌在沒有乳糖的環境中生存時，lac 操縱元處於抑制狀態。此ｉ基 因在其自身的啓 動子Pi 控制下，低水平、組成性表現産生抑制蛋白 R，每個細 胞中僅維持約 10 個分子的抑制蛋白。R 以四聚體形式與操縱子ｏ結合，阻礙了 RNA 聚合酶 與啓 動子 Plac 的結合，阻止了基因的轉錄起動。R 的抑制作用不是 絕對的，R 與ｏ偶爾解離，使細胞中還有極低水平的β－半乳糖苷酶 及滲透酶 的 生成。 當有乳糖存在時，乳 糖受 β－半乳糖苷酶 的催 化轉變爲別乳糖，與 R 結 合，使 R 構象變化，R 四 聚體解聚成單體，失去與 ｏ的親和力，與ｏ解離，基因轉錄開放，使β－半乳糖苷酶 在細胞內的含量可增 加 1000 倍。這就是乳糖對lac 操縱元的誘導作用。 一些化學合成的乳糖類似物，不受β－半乳糖苷酶 的催化分解，卻也能與R 特異性結合使 R 構形變化，誘導 lac 操縱元的開放。例如異丙基硫代半乳糖苷 (isopropylthiog-galactoside，IPTG)就是很強的誘導劑，不被細菌代謝而十分穩定。 X-gal（5-溴-4-錄-3吲哚- -β-半乳糖苷 ）也是一種人工化學合成的半乳糖苷，可被 β－半乳糖苷酶 水解産生蘭色化合物，因此可以用作 β－半乳糖苷酶 活性的指示 劑。IPTG 和X-gal 都被廣泛應用在分子生物學和基因工程的工作中。 7 陳世明 整理 乳糖，IPTG 和Xgal 的結構 CAP 的正性調控 細菌中的cAMP 含量與葡萄糖的分解代謝有關，當細菌利用葡萄糖分解産 生能量時，cAMP 生成少而分解多，cAMP 含量低；相反，當環境中無葡萄糖可 供利用時，cAMP 含量就升高。細菌中有一種能與cAMP 特異結合的cAMP 受體 蛋白CRP（cAMP receptor protein），當CRP 未與cAMP 結合時它是沒有活性的， 當 cAMP 濃度升高時，CRP 與 cAMP 結合並發生空間構象的變化而活化，稱爲 CAP（CRP-cAMP activated protein），能以二聚體的方式與特定的DNA 序列結合。 在lac 操縱元的啓 動子Plac 上游端有一段序列與Plac 部分重疊的序列，能與 CAP 特異結合，稱爲CAP 結合位點（CAP binding site）。CAP 與這段序列結合 時，可增強 RNA 聚合酶 的轉錄活性，使轉錄提高 50 倍。相反，當有葡萄糖可 供分解利用時，cAMP 濃度降低，CRP 不能被活化，lac 操縱元的結構基因表現 下降。 在lac 操縱元的啓 動子 Plac 上游端有一段序列與 Plac 部分重疊的序列，能與 CAP 特異結合，稱爲 CAP 結合位 點（CAP binding site）。CAP 與這段序列結合時，可增強 RNA