IgA肾病大鼠肾组织中Toll样受体4的表达及意义.pdfVIP

广东医学 2015年 10月第 36卷第 20期 GuangdongMedicalJournal Oct．2015，Vo1．36，No．20 · 3123 · IgA肾病大 鼠肾组织中Toll样受体4的表达及 意义水 王缨，汪国平，李弼民 南昌大学第一附属医院肾内科(南昌330006) 【摘要】 目的 观察IgA肾病(IgAN)大鼠中Toll样受体4(TLR4)、髓样分化因子88(MyD88)、核因子KB (NF—KB)的表达，探讨TLR4信号通路在 IgAN大鼠发病 中的作用。方法 20只雄性 sD大鼠随机分成 IgAN组 和对照组，每组 10只。在造模完成后处死大鼠，取肾脏，肾组织切片行PAS染色、免疫荧光观察大鼠病理变化，并 行免疫组化法检测肾组织中TLR4、MyD88、NF—KB的表达，RT—PCR方法检测TLR4、MyD88、NF—KBmRNA的 表达。结果 IgAN组TLR4、MyD88主要分布在肾小球和肾小管，NF—KB主要分布在 肾小管，表达量较对照组明 显增加 (P0．05)。IgAN组肾组织中TLR4、MyD88、NF—KBmRNA表达量均较对照组明显升高。IgAN组肾组织 TLR4与MyD88、NF—KB的表达均呈正相关性(r=0．951，r=0．943，P0．01)。结论 TLR4信号通路可能参与了 IgAN的发生发展 。 【关键词】 IgAN；Tou样受体4；髓样分化因子88；核 因子KB IgA肾病 (IgAN)是 目前最常见的原发性肾小球疾 国anbo公司)，DANmaker、PCR扩增试剂盒 (ranszol， 病之一 ，IgAN典型的临床表现为黏膜感染 ，尤其是上 北京中杉)、BH一2型双 目光学显微镜 (日本 Olympus 呼吸道感染 同时或之后短期内伴发肉眼血尿，因此研 公司)。 究认为天然黏膜免疫异常在 IgAN的发生 中有一定的 1．3 取材及标本处理 实验第9周造模完成后 ，采用 作用。天然免疫分子 Toll样受体 (Toll—likereceptor， 3％戊巴比妥麻醉大鼠迅速游离 肾脏，放入 10％中性 TLRs)是一个模式识别受体 ，可通过感知病原体相关 甲醛固定后用石蜡进行包埋，留待行光镜检查及免疫 联的分子模式激活防御机制以应对暴露的各种病毒、 组化，另一部分放入 一80℃保存备用。 细菌等病原体的入侵。在天然免疫和获得性免疫 中均 1．4 免疫组化法检测 肾组织 TLR4、MyD88、NF—KB 起重要的作用。既往研究表明，TLRs与肾脏病关系密 的表达 采用 SP法检测，阳性组织呈棕色，半定量结 切，但TLR4通路与IgAN的关系鲜见研究。本研究通 果分析采用 Imagepro—plus6．0图像采集软件，每张 过建立 IgAN 大 鼠模 型，观察 IgAN大 鼠肾组织 中 切片随机采集20个视野 (1Ox物镜)，用magepro—plus TLR4、髓样 分化因子 88(MyD88)、核 因子 KB(NF— 6．0图像分析软件对每个视野进行分析，其 阳性染色 KB)的表达，初步探讨 TLR4通路在 IgAN中的作用与 面积／视野总面积即为免疫组化阳性 目标的强度。 机制。 1．5 RT—PCR法检测 TLR4、MyD88、NF—KB的表达 1 材料与方法 提取细胞总RNA，按照Transzol试剂说 明书进行操 作反转录合成 cDNA。采用北京中杉生物科技有限公 1．1 动物模型的构建及分组 SPF级 SD大 鼠20只， 司PCR反应试剂盒进行 PCR扩增。反应条件为94℃ 购 自湖南斯莱克景达实验动物有限公司，均为雄性，体 3min，94cIC30S，58oC30S，72℃ 12S，72℃ (退火温