IκBα低表达转基因小鼠的建立及其表达调控.pdfVIP

广东医学 2015年 12月第 36卷第24期 GuangdongMedicalJournalDec．2015，Vo1．36，N0．24 ·3737 · 基 厕 磷 究 IKBoL低表达转基因小鼠的建立及其表达调控术 刘青言，夏机 良，肖东，彭 白露 南方医科大学肿瘤研究所 (广州510515) 【摘要】 目的 构建IKBe(低表达转基因小鼠并分析IKBe(的表达调控机制，为体内考察IKBe(基因的整体效 应提供基础。方法 构建转基 因构件 RV—IKBe(一Loxp—Mut—Neo载体，将线性化载体 电转入胚胎干细胞， Southernblot筛选阳性克隆，再将阳性克隆进行显微囊胚注射 ，获得嵌合 鼠，嵌合 鼠与C57BL／6N交配获得 Fl代杂 合型 IKBo~knockin小鼠。纯合型 IKBe(knockin小鼠与 EllaCre鼠杂交，其后代 自交获得删除 Loxp位点区间的 IKBe(knockout纯合型小鼠，PCR分别鉴定基因型。Westernblot检测转基因小鼠各器官IKBe(的表达情况，以正常 野生C57／B6小鼠为对照。结果 经PCR方法鉴定得到 IKBe(knockin和 IKBe(knockout转基因小鼠；Western blot 结果显示与野生型小鼠相比，F2代Is：Beknockin纯合型小鼠的脾、胸腺、肺等器官中IKBe(的表达量降低，在IKBe( knockin杂合型小鼠中，除上述器官外，皮肤、鼻咽、胃等器官中突变型染色单体 IKBe(的表达量也比野生型低；F2 代IKBotknockout小鼠多数器官中IKBe(的表达量低于正常野生C57／B6小鼠。结论 成功建立了在多数器官低 表达IKBa的转基因鼠；其中KB位点可能参与调控胸腺、脾、肺、鼻咽、皮肤、胃等器官中IKBa的表达，而其上游 3kb调控序列可能参与调控肝、鼻咽、胃、胰腺、小肠等器官中IKBa的表达。 【关键词】 IKBe(；低表达；转基因；调控机制 EstablishmentoftransgenicmicewithIKB low expressionandtheregulatorymechanism oftheIgBc~expression． LIUQng—yan，XIA 一liang，XIAODong，PENGBai—lu．CancerResearchInstitute，SouthernMedicalUniversity， Guangzhou510515，China Correspondingauthor：PENGBai—lu．E—mail：pengbailu@ 126．com 【Abstract】Objective InordertostudythewholebiologicalfunctionofIKBe(invivo，wedevelopedanIKBe(1ow expressiontransgenicmiceand analyzetheregulatorymechanism ofIKBe( expression．M ethods Thetargeting vector RV—IKBe(一Loxp—Mut—Neowasconstructed．thenthelinearizedvectorwasinjectedintoembryonicstemcells．South— ern blottingwasusedtoscreenthepositiverecombinantclones．Thenthepositiveclonewasmicroinjectedintoblastocysts togeneratechimericmice．Cross—breedingthechimericwithwild—type(C57BL／6N)micegeneratedheterozygousIKBe( knockinmice．HomozygousIKBe(knockinmicewerecross—bredwithEllaCremicetogenerateoffspring，whichinter