MassARRAY单核苷酸多态性MALDI-TOF质谱基因分型法检测未成熟冬虫夏草子座中多个冬虫夏草菌突变基因型.pdfVIP

北 京 大 学 学 报 ( 医 学 版 ) JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES) ·259 · · 论 著 · MassARRAY单核苷酸多态性 MALDI-TOF质谱 基因分型法检测未成熟冬虫夏草子座中多个冬虫 夏草菌突变基因型 高 凌 ，李晓红 ，赵建晴 ，陆继红 ，朱佳石 (1．美国华茂公司北京临床药理研究中心，北京 100088；2．博奥生物有限公司，北京 102206；3．PharmanexRe— searchInstitute，ProvoUT 84601，USA；4．新疆石河子大学药学院，石河子 832000) [摘 要] 目的：检测未成熟冬虫夏草子座中同时存在的多种突变基因型冬虫夏草菌。方法：采用MassARRAY单 核苷酸多态性 (singlenucleotidepolymorphism，SNP)质谱基因分型法 ，根据冬虫夏草菌基因内转录间隔区(ITS)序列 的大量散在点突变 ，设计8个SNP延伸引物，利用质谱测定各个SNP位点的单核苷酸延伸反应，检测未成熟冬虫夏 草子座中与GC偏倚基因型(gb#AB067721)冬虫夏草菌相关的突变基因型。结果：GC偏倚基因型和两个 AT偏倚 基因型同时存在于未成熟天然冬虫夏草子座中。SNP基因分型法还检测到另外至少两个未知序列的突变基因型。 结论：已知的3个冬虫夏草菌基因型的共存提示在冬虫夏草的子座萌发阶段和成熟过程中可能存在 DNA转换点 突变；另外两个未知序列的基因型的存在提示冬虫夏草中可能存在 DNA颠换点突变。 [关键词]冬虫夏草；基因型；突变；多态性，单核苷酸 [中图分类号]R282．71 [文献标志码]A [文章编号]1671—167X(2011)02-0259-08 doi：10．3969／j．issn．1671—167X．2011．02．019 Detection of multiple Ophiocordyceps sinens mutants in premature stroma of CordycepssinensisbyM assARRAY SNP MALDI-ToFmassspectrum genotyping GAOLing ，LIXiao—hong ，ZHAO，Jian—qing，LUJi．hong ，ZHUJia—shi，， (1．PharmanexBeijingClinicalPharmacologyCenter，Beijing100088，China；2．CapitalBioCo．，Beijing102206， China；3．PharmanexResearchInstitute，ProvoUT 84601，USA；4．SchoolofPharmacy，ShiheziUniversity，Shihezi 832000，China) ABSTRACT Objective：ToexaminethemutantsofOphiocordycepssinensis(Os)inthestromaofprema． tureCordycepssinensis(Cs)．Methods：UsedMassARRAY singlenucleotidepolymorphism (SNP) MALDI—TOFmassspectrum genotyping．designedeightSNP extension primersonthebasisofthe scat— tered．multiplepointmutationsofknownOsmutantswithintheirintemaltranscribedspacer(ITS)seg— ments，andexaminedtheOsmutantgenotypesrelatingtotheGC—biasedOsgenotype(gb#AB067721) inprematureCsstroma．Results：ThetwoAT—biasedgenotypesandtheGC—biasedOsweresimultaneous． 1Ydetected inprematureCsstroma．SNPgenotypingalsodetectedatleasttwootherOsgenotypesofan— kno