MIA2慢病毒表达载体构建及其表达活性的研究.pdfVIP

4288 重庆医学 2014年 11月第 43卷第 32期 论著 ·基础研究 doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2014．32．005 MIA2慢病毒表达载体构建及其表达活性的研究 杨 花 。，杨少奇 ，何 芳 ，胡建国 ，李 鹏 (1．宁夏医科大学，银川 750004；2．宁夏医科大学总医院消化 内科 ，银川 750004； 3．宁夏 医科大学总医院NICU，银川 750004) 摘 要 ：目的 构建黑色素瘤抑制蛋 白2(MIA2)慢病毒表达载体 ，并将其通过脂质体转染到 HepG2细胞 中，观察转染前后 MIA2表达变化及其对细胞凋亡的影响。方法 以pDONR223一MIA2为模板 ，PCR扩增 MIA2，构建 pLVX—IRES-ZsGreenl— MIA2慢病毒表达载体，体外瞬时转染肝癌细胞HepG2，荧光显微镜下观察 MIA2的表达情况，用实时荧光定量 PCR(RT—PCR) 检测 HeF)G2细胞 中MIA2mRNA 的表达情况 ，噻唑蓝(MTT)法和克隆形成实验检测细胞增殖的情况。结果 成功构建 pLVx— IRE ZsGreenl—MIA2慢病毒表达载体；RT—PCR结果显示，阴性对照组与实验组细胞MIA2mRNA表达水平差异有统计学意义 (P0．05)；MTT检测发现 ，实验组细胞增殖数 目较 阴性对照组明显减少，差异有统计学意义 (P0．05)；此外，实验组的克隆形 成数和细胞迁移数均较阴性对照组明显减少，差异有统计学意义 (P0．05)。结论 pIRES2一ZsGreenl—MIA2可显著下调 MIA2 的表达水平进而抑制肝癌细胞 HepG2的体外增殖及迁移能力。 关键词 ：肝肿瘤；细胞增殖；黑色素瘤抑制蛋 白2；Heg)G2细胞 中图分类号 ：R575．2 文献标识码 ：A 文章编号 ：1671-8348(2014)324288—03 Construction ofpLVX。IRES-ZsGreenl-M IA2 lentiviralexpressionvectoranditsexpression activity ． YangHua ，YangShaoqi ，HPFang ，H “Jianguo ，LiPeng ’。 (1．NingxiaMedicalUniversity，Yinchuan，NingJcia750004，China；2．DepartmentofGastroenterology， theAffiliatedGeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity，Yinchuan，Ningxia750004，China； 3．DepartmentofNICU，theAffiliatedGeneralHospitalofNingxiaMedicalUniversity，Yinchuan，Ningxia750004，China) Abstract：Objective ToconstructanLentiviralexpressionvectorofpLVX-IRES—ZsGreenl—MIA2targetingtoMIA2andin— vestigateitseffectontheexpressionofMIA2andgrowthofHCCcelllineHepG2invitro，observeMIA2changesandtheinfluence onapotheosis，thustoprovidepreliminaryexperimentalfundamentforsuccessiveresearchingontheroleofMIA2inthepathogene— sisofHCC．Methods ThesequenceofpLVX—I