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microRNA-21对膀胱癌T24细胞增殖的影响及对VEGF和AP1蛋白的调节.pdf

第 31卷 第 3期 中山大学学报 (医学科学版) Vo1.3l No.3 2010年 5月 JOURNALOFSUNYAT—SENUNIVERSITY(MEDICALSCIENCES) Mav 2010 microRNA.21对膀胱癌T24细胞增殖的影响 及对 VEGF和AP1蛋白的调节 杨 国胜 ,刘百川 H,尹智峰 (1.广东省第二人民医院泌尿外科 ,广东 广州 510317;2.南华大学第二附属医院泌尿外科 ,湖南 衡阳 421001) 摘 要 :【目的】研究mieroRNA一21(miR一21)对膀胱癌 T24细胞系中血管内皮生长因子(vascularendothelialgrowth factor,VEGF)和活化因子蛋白一1(activatorprotein一1,AP1)及 mRNA表达的调节作用,探讨 miR.21对膀胱癌T24细胞增殖的 影响。 【方法】用人工合成的miR.21相应的双链互补DNA片段,插入pSileneerMT3.1-H1neo载体表达载体,经测序鉴定后 作为microRNA的表达质粒:用脂质体将 miR.21高表达质粒转染进T24膀胱癌细胞,经 G418筛选获得阳性克隆。用RT— PCR技术和Westernblot方法分别检测该细胞系中VEGF和API的mRNA和蛋白表达情况。四甲基偶氮唑蓝(uYr)法检测 膀胱癌T24细胞增殖的变化情况。 【结果】Westernblot结果显示miR一21能够增加VEGF和AP1蛋白的表达,RT—PCR方法 分析显示VEGF和AP1mRNA水平升高。M1Tr显示转染后细胞的生长速率比未转染的细胞明显加快。结【论】miR一21促进 T24膀胱癌细胞增殖。提示可能与VEGF和AP1的低表达有关。 关键词 :microRNA一21;VEGF;AP1;T24细胞;膀胱肿瘤 中图分类号:R737.14 文献标志码:A 文章编号 :1672—3554(2010)03—0365—06 EffectofCellProliferationandRegulationofVEGF andAPIProteinviamicroRNA.2linT24Cell YANG Guo-sheng,LIU Bai—chuan ,YIN Zhi-feng (1.TheSecondPeopleSHospitalofGuangdongProvince,Guangzhou510317,China; 2.DepartmentofUrology,TheSecondAffiliatedHospital,NanhuaUniversity,Hengyang421001,China) Abstract: O【bjective】ToinvestigatetheroleofmiR一21ontheexpressionofvascularendothelialgrowthfactor(VEGF)and activatorprotein·1(AP1)proteinanditsmRNA,andtoexploretheeffectofmicroRNA一21inregulationoftheproliferationof T24bladdercancercells.M【ethods】Usingthesyntheticdouble—strandbasepair(bp)DNA,whichisbasedonthesequenceof themiR一21, insertedtheDNA ofmiR-21intothevectorofpSilencerTM 3.1一H1neo, andclonedthemicroRNAhighlyexpression plasmid.Th enthemiR一21plasmidweretransferred intoT24withLipofeetamine2000,consequently ceillinewiththemiR一21 highlyexpression

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