RNA干扰作用于HIV-1vpr基因的筛选实验研究.pdfVIP

· 1671 · · 论 著 · RNA干扰作用于 HIV一1vpr基 因的筛选实验研究 张 权 ，周 泉，何 艳 ，龚 国忠，郑煜煌，周华英，黄 娜 【摘要】 目的 筛选鉴定针对H1V—Ivpr基因的小干扰RNA (siRNA)片段。方法 根据siRNA设计要求合成 siRNA56、siRNA160和siRNA185寡核苷酸片段，分别转染至含 HIV一1vpr质粒的HEK293T细胞 ，并进行总RNA提 取 ，采用 Real—timePCR和 Westernblotting分别从核酸和蛋 白水平对 HIV一1vpr基 因表达水平进行验证。结果 siRNAs成功转染含HIV一1vpr质粒的HEK293T细胞，降低了HIV一1vpr基因的表达水平，其中在RNA水平siRNA160 组干扰抑制作用最强，抑制率为89％；在蛋白水平 siRNA56组干扰抑制作用最强 ，抑制率为96％。结论 3个基因片 段的siRNA均可以下调HIV—Ivpr的表达水平，但存在差异性，为探索HIV／AIDS基因治疗的可行性和高效性提供了 可靠的实验依据。 【关键词】 RNA干扰；HIV一1；HIV—Ivpr基因；HEK293T细胞 【中图分类号】R394．114 【文献标识码】A doi：10．3969／j．issn．1007—9572．2015．14．017 张权 ，周泉 ，何艳，等．RNA干扰作用于 HIV一1vpr基 因的筛选实验研究 [J]．中国全科医学，2015，18 (14)：1671—1674．[www．chinagp．net] ZhangQ，ZhouQ，HeY，eta1．ScreenandidentifyRNAinterferenceonHIV—lvprgene[J]．ChineseGeneral Practice，2015，18 (14)：1671—1674． ScreenandIdentifyRNAInterference，onHIV—lvprGene ZHANGQuan，ZHOUQo ，HEYah，eta1．Departmentof InfectiousDzieases，theSecondXiangyaHospital，CentralSouthUnive~ity，Changsha410011，China 【Abstract】 0bjective ToscreenandidentifyrfagmentsofsiRNAonHIV—lvprgene．Methods Thisstudy designedandsynthesizeds!RNA56，siRNA160andsiRNA185oligonucleotiderfagmentsaccordingtosiRNAdesignrequirements， transfectedthem intoHEK293TcellscontainingplasmidsofHIV 一1vprgenes，extractedtotalRNAandverifiedHIV一1vprfrom levelsofnucleicacidandproteinbyReal—timePCR andWesternblotting．Results Th esiRNA successfullytransfectedHEK 293TcellscontainingHIV 一1vprplasmidsandreducedtheexpressionofHIV 一1vprgenes．Th einhibitionrateofsiRNA160 groupwasthehighestinRNAlevel(89％)andthatofsiRNA56groupwasthehighestinproteinlevel(96％)．Conclusion Th esiRNAsofthreegenerfagments，whichcandecreasetheexpressionHIV—lvpr，provideareliableandefficientexperimental basisforexplorationofHIV／AIDsgenetreatment． - 【Keywords】 RNAinterference；H