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　　运动免疫组织化学实验技术的应用进展与研究 免疫组织化学（Immunohistochemistry）又称免疫细胞化学。它是组织化学的分支，是用标记的特异性抗体（或抗原）对组织内抗原（或抗体）的分布进行组织和细胞原位检测技术。它把免疫反应的特异性、组织化学的可见性巧妙结合起来，能在微观世界原位地确定组织结构的化学成分乃至基因表达。免疫组织化学能够做到方法统一，定性可靠，定位精确和定量准确，这是较之于其他化学方法不可替代的优越性所在。 1941年Coons首先用荧光素标记抗体检测肺组织内的肺炎双球菌获得成功。60年代Nakane建立酶标抗体技术铁蛋白标记Ab技术。70年代Stemberger改良上述技术，建立辣根过氧化物酶抗体过氧化物酶（PAP）技术，使免疫细胞化学得到广泛应用。免疫组织化学的技术根据染色方式可分成贴片染色和漂片染色；根据AgAb结合方式可分成直接法、间接法和多层法；根据标记物可分成（1）免疫荧光组织化学：常用FITC、TMRITC、RB200、Taxas Rad等荧光素；（2）免疫酶组织化学：常用辣根过氧化物酶（HRP）、碱性磷酸酶（AKP）、葡萄糖氧化酶（GOP）；（3）铁蛋白、胶体金等：主要应用于免疫电镜；（4）放射自显影：如各类同位素（因涉及污染和防护难一般不用）。 免疫组织化学技术的应用范围极其广泛，凡是组织细胞内具有抗原性的物质，如肽类、激素、神经递质、细胞因子、受体、表面抗原等均可用免疫组织化学方法显示，因此目前在体育运动领域的基础理论与实践应用科研中都被广泛运用,。最近几年，分子生物学研究异常活跃，但最终还要回归到形态上来。用免疫组织化学方法对所研究的大分子物质进行定位、定性与定量，进而深入研究其功能，综合分析其作用机理。 1 免疫荧光组织化学 免疫荧光组织化学是利用荧光素标记物作为显示剂，通过免疫亲和（抗原-抗体特异性结合）的途径，在组织切片或细胞涂片上，原位显示生物大分子物质的动态变化的一门染色技术。其具有免疫组化技术的全部特点和优势，但是存在染色结果难以长时间维持，呈现时间短，需及时记录的弱点。其应用同免疫组化技术的应用范围一样极其广泛，如潘珊珊等（2004）[1、2] 。采用免疫荧光组织化学法结合激光共聚焦扫描和计算机图像分析技术，观察研究心脏与肾脏心钠素受体的分布和运动对心脏与肾脏心钠素受体基因表达的影响。但由于存在的弱点，其应用受到一定的限制。 2 免疫酶组织化学 免疫酶组织化学是利用酶标记物作为示踪剂，结合组织化学底物显色反应，通过免疫亲和（抗原-抗体特异性结合）的途径，在组织切片或细胞涂片上，原位显示生物大分子物质的动态变化的一门染色技术。而且不存在免疫荧光组化技术的弱点，能长期保存染色结果进行观察分析。自从20世纪40年代以来，免疫酶组化技术经历了辣根过氧化酶－抗过氧化酶（PAP）技术、亲和素－生物素（ABC）法、链霉亲和素－生物素（SABC、SP、LSAB）法、非生物素－亲和素检测系统的超敏聚合酶或多聚辣根过氧化物酶免疫组化法（EPOS、EnVision）的发展过程，此技术在不断更新检测手段和克服自身不足中日趋完善，呈现出其他技术无法替代和比拟的优势。其应用因此也十分广泛，故通常把它简称为免疫组化技术。 2.1 神经（脑）方面的研究应用 陈家旭等（1999）[3]通过免疫组化ABC法观察长期大强度运动下大鼠脑组织神经肽Y、亮氨酸脑啡肽、强啡肽A1－13的变化。苑晓玲等（2000）[4]通过免疫组化SP法观察不同动情周期、不同训练强度时雌性大鼠下丘脑促性腺激素释放激素(GnRH)和beta;-内啡呔(beta;-EP)免疫反应阳性细胞的定量变化。袁华等（2002）[5]研究康复功能训练后，脑梗死大鼠脊髓中Fos、降钙素基因相关肽(calcitonin gene－related peptide，CGRP)、热休克蛋白(heat shock protein 70，HSP70)蛋白表达的变化。段淑荣等（2004）[6]研究康复训练对脑梗死大鼠梗死灶周围脑源性营养生长因子（brain-derived neurorrophic factor，BDNF）表达的影响。刘鸿宇等（2005）[7.8]、张荷玲等（2005）[9]、孙国欣等（2006）[10]通过免疫组化ABC与SABC法研究下丘脑腹内侧核和背内侧核、室旁核和视上核、杏仁体核簇、海马CA1区中神经型（ｎＮＯＳ）、诱导型（ｉＮＯＳ）、内皮型（ｅＮＯＳ）一氧化氮合酶与不同运动模式或状态之间的关系。谭来勋等（2005、2006）[11.12]通过免疫组化方法观察运动训练后大鼠脑梗死周边区星形胶质细胞胶质纤维酸性蛋白和突触素等的变化。 2.2 心肌与骨骼肌方面的研究应用 陆爱云等（2004）[13]通过免疫组化ABC法不同强度运动训练对心脏