shRNA抑制survivin基因表达对脐静脉血管内皮细胞增殖与凋亡的影响.pdfVIP

4922 重庆医学 2015年 12月第 44卷第35期 论著 ·基础研究 doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2015．35．008 shRNA抑制 survivin基因表达对脐静脉血管 内皮细胞增殖与凋亡的影响 马 莎，林 俊△，晋 松 ，李 芹，张 虹 ，王 静 (云南省第一人民医院风湿免疫科 ，昆明 650032) [摘要] 目的 研究靶向存活素(survivin)的短发夹RNA真核表达质粒(shRNA)对脐静脉血管内皮细胞增殖与凋亡的影 响。方法 合成靶 向survivin的shRNA真核表达质粒及 阴性对照质粒 ，用脂质体法将质粒转染至经 VEGF(50ng／mL)处理的 HUVEC细胞 ；转染48h后 ，采用实时定量聚合酶链反应 (PCR)和蛋白印迹法检测 HuVEC 中survivin的mRNA表达及蛋 白水 平。四甲基偶氮唑蓝 (MTT)法检测细胞增殖；TUNEL法检测细胞凋亡。结果 (1)survivin—shRNA质粒试验组与阴性对照 shRNA质粒组及空白对照组比较 ，转染 48h后人脐静脉血管 内皮细胞 survivin的mRNA及蛋 白表达水平明显下降(P0．05)。 (2)与 阴性对照 shRNA 组及 空白对照组 比较 ，转染后 的人脐静脉血管内皮细胞增殖能力明显下降。转染后 24、48、72h生长抑制 率分别为 (13．53±3．91) 、(38．97士1．82) 、(65．75±1．83) ，于转染后 72h最为显著 。(3)试验组凋亡率为 (28．07_--4- 1．71) ，较 阴性对照组(11．45士1．52) 和空白对照组 (10．04±1．46) 显著增高(P0．05)。结论 靶 向survivin的 shRNA质 粒能通过下调 survivin表达，进而抑制人脐静脉血管内皮细胞增殖并促进其凋亡。 [关键词] 血管内皮生长因子；存活素；shRNA；增殖；细胞凋亡 [中图分类号] R593．22 [文献标识码] A [文章编号] 1671—8348(2015)35—4922—03 EffectsofshRNA-mediated survivinsilencingonproliferation andapoptosisofhumanumbilicalvein endothelialcells MaSha，LinJun ，JinSong，LiQin，ZhangHong，WangJing (DepartmentofRheumatoidandImmunology，theFirstPeoplesHospitalof YunnanProvince，Kunming，Yunnan 650032，China) [Abstract] Objective ToinvestigatetheeffectofshorthairpinRNA(shRNA)eukaryoticexpressionvector—mediatedsilen— cingofthesurvivin-geneonproliferationandapoptosisofhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVEC)．Methods TheshRNA vectortargetingthesurvivingeneandnegativecontro1vectorweretransfectedintohumanumbilicalveinendothelialcells(HUVEC) incubatedwith50ng／mLofrecombinantVEGFinvitrobylipofectamine2000．Transfectionafter48h，theexpressionofsurvivin mRNA andproteinwasdetectedbyquantitativereal-timePCR andW esternblo