shRNA沉默TRAF6基因对急性肝损伤小鼠炎症反应的影响.pdfVIP

第 45卷第3期第 278页 华 中科技大学学报 (医学版) Vo1．45 No．3 P．278 2016年 6月 ActaMedUnivSciTechnolHuazhofig Jun． 2016 shRNA沉默 TRAF6基因对急性肝损伤小鼠 炎症反应的影响 陈 锋 ， 张芙蓉 ， 何生松。， 庞 然 ， 许娟娟。， 董继华 武汉市妇女儿童医疗保健中心(武汉市儿童医院)重症医学科 ，武汉 430016 华中科技大学同济医学院附属协和医院 。感染科 。消化 内科 中心实验室，武汉 430022 摘要 ：目的 通过 shRNA沉默肿瘤坏死 因子受体相关因子 6(tumournecrosisfactorreceptorassociatedfactor6， TRAF6)基因表达，研究TRAF6沉默基因对 内毒素 ／I)-氨基半乳糖 (LPS／D-GalN)诱导的急性肝衰竭小鼠炎症反应的影 响。方法 通过体外实验筛选针对 TRAF6基因的最有效小干扰 RNA(siRNA)序列，采用流体力学注射法将 pTRAF6- shRNA表达质粒转染BALB／e小鼠，24h后重复注射 1次。第 2次注射后 24h，予 LPS／I)_GalN腹腔注射制备急性肝 衰竭 内毒素炎症模型。设正常对照组、模型对照组、空 白质粒 ／LPS组及 RNAi／LPS组。观察各组小鼠肝脏病理变化， Real-timePCR检测 TRAF6、IL-6及 COx-2mRNA的表达 ，ELISA检测血清 TNF-a、IL-I~及 TGF-13l水平变化 ，West- ernblot检测肝细胞 TRAF6、NF-KBp65的表达 。结果 Real-timePCR及Westernblot检测显示 ，pTRAF6-shRNA1能 有效沉默TRAF6mRNA及蛋白表达，其中TRAF6mRNA表达较正常小 鼠下降约 6O．13 ，TRAF6蛋 白表达降低约 52．O8％，差异均有统计学意义(均 P0．01)。ELISA检测显示各组小 鼠TNF_a、IL-lfl均于造模后 8h达到峰值 ，TGF_ Bl于 16h达到峰值；RNAi／LPS组小鼠血清 TNF-a、IL-I~及 TGF-~。水平明显低于同时间点模型对照组 Real-time PCR结果显示 RNAi／LPS组小鼠IL一6、C0x_2及 TRAF6mRNA表达下降，与模型对照组比较差异均有统计学意义(均 PO．01)。Westernblot结果显示 RNAi／LPS组小鼠肝组织总蛋 白NF-．cBp65表达水平显著高于正常对照组 (P 0．05)，与模型对照组无差异，而胞核 NF-~Bp65明显低于模型对照组 (PO．05)。结论 pTRAF6-shRNA可能通过下 调 NF-~Bp65水平 ，抑制炎症相关细胞因子和炎性介质表达水平 ，从而减轻 内毒素 ／半乳糖诱导的小 鼠急性肝损伤。 关键词 ：TRAF6； RNA干扰 ； TLR4信号通路 ； NF- ； 急性肝衰竭 中图分类号 ：R657．3 DOI：10．3870／j．issn．1672—0741．2016．03．008 EffectofSilencingTRAF6GeneExpressionwithshRNA on Inflammatory ResponseinMicewithAcuteLiverInjury ChenFeng ，ZhangFurong ，HeShengsong。etal IntensiveCareUnit，WuhanMedicalandHealthcareCenterforWomenandChildren，Wuhan430016，China DepartmentofInfectiousDiseases，UnionHospital，TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityof Scie