大白杜鹃组织培养研究.docVIP

大白杜鹃(Rhododendron decorum Franch)是杜鹃花科(Ericaceae)杜鹃花属(Rhododendron L．)常绿木本植物，是我国特有种，主要分布在四川、云南、贵州、西藏、湖北、湖南等地，生于海拔1000～3200m的林下、灌丛中[1]。大白杜鹃花大，花冠漏斗状钟形，白色或带蔷薇色，花梗具绿色或粉红色斑点，花开之时，有阵阵清香扑面而来，沁人心脾其性味“苦，凉，有小毒”，具有调和经血、润肺清喉、益气宁神等功效此外，花瓣富含多种氨基酸和维生素，味道精美、营养丰富[2]大白杜鹃的利用主要以采集野生资源为主，人为的乱采滥挖，使生境遭到严重破坏，资源受到威胁现有的[3] [4]，但存在繁殖系数低，继代、生根困难等问题。以种子胚为外植体的组培研究尚未见报道。种子作为组培材料较茎段、茎尖有取材方便，不伤害母株等优点，适合大规模育苗。以大白杜鹃成熟种子为外植体，对大白杜鹃进行了组织培养研究，以期建立大白杜鹃组培快繁体系，为大规模开发应用大白杜鹃资源提供技术支持。1　材料与方法 供试材料为多年生大白杜鹃 (Rhododendron decorum Franch) 的成熟蒴果，材料采自百里杜鹃自然保护区。 取大白杜鹃尚未开裂的蒴果，在流水下用牙刷刷洗蒴果表面，在超净工作台上用75%乙醇消毒30，0.1%升汞溶液消毒10min，无菌水冲洗1次，再用10%过氧化氢溶液浸泡35min，无菌水冲洗56次，最后用消毒滤纸吸干表面水分，剥开蒴果，将种子抖撒在种子萌发培养基上。 1.2.2试验设计以大白杜鹃当年生种子为外植体，以1/4 MS培养基为基本培养基，附加不同浓度ZT(玉米素)、TDZ(苯噻隆)、2-ip(2-戊乙烯基腺嘌呤)、GA(赤霉素)、NAA(奈乙酸)、IBA(吲哚丁酸)等多种植物激素，力求找出适合大白杜鹃种子培养各个阶段的培养基配方。种子萌发试验激素种类用量愈伤组织诱导丛生芽继代试验激素浓度配比丛生芽伸长激素浓度配比组培苗生根试验激素浓度配比所配培养基除生根培养基的蔗糖为25 mgL外，其他培养基均加入30mgL蔗糖和10gL琼脂，pH5.45.8。1.3　培养条件培养温度(251)℃，光照时间12hd，光照强度4060μmo1/(m2·s)。Table 1　Test of different hormone on seed germination 培养基编号 No. 激素组合(mg/L) Hormone combination A1 TDZ 0.5＋NAA 0.01 A2 ZT 0.5＋NAA 0.01 A3 2-ip 0.5＋NAA 0.01 A4 1/4 MS空白培养基 Table 2　Test of different hormone on inducing callus and multiplication of shoot clumps 培养基编号 No. 激素组合(mg/L) Hormone combination ZT NAA 愈伤组织诱导试验 B1 0.5 0.1 B2 0.5 0.5 B3 0.5 1.0 B4 0.8 0.1 B5 0.8 0.5 B6 0.8 1.0 B7 1.2 0.1 B8 1.2 0.5 B9 1.2 1.0 B10 1.5 0.1 B11 1.5 0.5 B12 1.5 1.0 B13 2.0 0.1 B14 2.0 0.5 B15 2.0 1.0 丛生芽继代试验 C1 1.5 0.1 C2 1.5 0.5 C3 1.5 1.0 C4 2.0 0.1 C5 2.0 0.5 C6 2.0 1.0 表3　丛生芽伸长壮苗试验 Table 3 Test of different hormone on growth and sound seedling of shoot clumps 培养基编号 No. 激素组合(mg/L) Hormone combination TDZ GA D1 0.1 1.0 D2 0.5 1.0 D3 1.0 1.0 D4 0.1 2.0 D5 0.5 2.0 D6 1.0 2.0 表4　组培苗的生根试验 Table 4　Test of different hormone on inducing roots 培养基编号 No. 激素组合(mg/L) Hormone combination 活性炭ctive carbon(AC) NAA IBA E1 1.0 0 0.08 E2 1.0 1.0 0.08 E3 2.0 0 0.08 E4 2.0 1.0 0.08 E5 3.0 1.0 0.08 2　结果与分析 表，在14 MS培养基中加入植