中药复方雄黄-青黛治疗早幼粒细胞白血病分子机理的系统分析.docVIP

复方雄黄－青黛治疗急性早幼粒性白血病分子机理的系统分析中药复方复方，雄黄的成份是四硫化四砷（A），青黛的成份是靛玉红（I），丹参的成份是丹参酮 IIA（T）在小鼠APL疾病模型中，四硫化四砷丹参酮 IIA靛玉红ATI）3者联可以显著增加癌蛋白PML-RARα的泛素化降解可以显著增加APL白血病细胞的分化；与单个或者2个成份组合相比，增强骨髓细胞再分化调节因子的活性，并促进细胞G0/G1阻滞。更有意思的是，丹参酮 IIA和靛玉红可以上调水甘油通道蛋白9的基因表达活性，从而促进更多的砷进入恶性早幼粒细胞，这样就能显著增强砷引起的PML-RARα蛋白降解，提高疗效。四硫化四砷丹参酮 IIA和靛玉红治疗机制。四硫化四砷中医使用复方药物治疗疾病已经有至少2500年的历史但是，绝大多数复方的分子机理急性早幼粒性白血病（APL）是急性髓系白血病（AML）中的M3型病人骨髓里积累大量的不成熟的早幼粒细胞染色体易位t出PML-RARα融合基因。急性早幼粒性白血病癌细胞对分化诱导剂全反式维甲酸(ATRA)是敏感的这种药物可以通过修饰和代谢癌蛋白PML-RARα使癌细胞重新分化有意思的是，砒霜（三氧化二砷ATO）作为东西方传统医学中一种古老的药物，被证明是治疗APL的有效药物，PML-RARα降解有关。最近有报道，ATRA/ATO的联合使用，可以使APL病人的4年生存率超过90％。在上个世纪80年代，在中国的血液学和癌症专家努力阐释砒霜治疗APL分子机理，并将其与维甲酸结合，用于临床治疗该病的同时，完全根据中医理论，设计了一个治疗APL的中药方剂雄黄－青黛中药复方(简称RIF)其“君药”是一种矿物药－雄黄，另有青黛、丹参和太子参作为发挥辅助作用。令人鼓舞的是，多中心临床试验表明，这个复方对APL病人的完全缓解率是96.7%到98％，5年生存率达到86.88%，病人除一定的肠胃不适和皮疹外，没有严重的毒副反应雄黄和青黛配伍具有一定的抗APL活性大量文献也表明丹参具有抗肿瘤活性。太子参被认为具有提高免疫力的作用，在RIF复方中可能不是必不可缺的成份。雄黄的主要成份是四硫化四砷（A），青黛的有效成份是靛玉红（I），丹参的有效成份则是丹参酮 IIA（T）。急性早幼粒性白血病四硫化四砷靛玉红丹参酮 IIA急性早幼粒性白血病PML-RARα）细胞对FVB/NJ小鼠进行造模。对比空白组和单独或者两两配对A，T和I治疗组，联合应用ATI能显著性延长其白血病老鼠总体生命存活率，如图1A所示。在单独治疗组中，A显示了潜在的治疗效果。联合应用ATI能够减少脾和肝的重量（图1B），但是不会导致动物体重的减少。在ATI治疗的老鼠骨髓和脾脏中以晚期分化粒细胞为主，但在其他治疗组却很少 (图7)。与这个一致的结果是接受ATI治疗小鼠在骨髓和脾脏中表达粒细胞性分化抗原Gr-1和Mac-1的细胞明显比其他治疗组（图1 c）。单独A或T治疗也引起一些APL细胞分化。不同于空白组，ATI治疗方案能显著减少癌症的转移和防止破坏组织架构（图8）。这些结果表明，ATI结合能够强化小鼠急性骨髓性白血病模型的治疗功效而且副作用较少。 ATI对体外人类APL细胞分化的协同效果 我们发现，除了T以外，单独的A或T治疗引起人类APL细胞系NB4以及原代培养的新鲜APL细胞一定程度细胞分化的形态特征，而ATI组合治疗不仅仅能够在这些细胞中诱导了更高层次的成熟分化，而且对耐NB4- R2ATR的ATRA细胞也是有效的（图2A）。与空白或单独 或两两配对A和T治疗组相比较，ATI联合治疗对细胞显示出更高的活性，产生了由NBT还原法检测的氧化应激和CD11b/CD14蛋白表达上调（图2B和C）。为了测试A和/或T和/或I对APL细胞是否有协同或相加作用，使用中位数效应法分析单独或联合用药的剂量-效应曲线，其中组合指数（CI）小于，等于，和多于1分别表示协同，相加和拮抗作用。我们发现A，T和I在浓度范围为0.25至1.0μM的CI值1小于（图2D），说明药物之间具有协同效应。 ATI缓解转录抑制 转录因子，如CCAAT /增强结合蛋白（C / EBPs）和PU.1，对正常造血功能和粒细胞成熟起到关键作用。APL细胞中抑制了该转录因子。我们发现，用ATI联合处理NB4细胞时，给药第2天上调蛋白C/EBPα并随后下降，而下调了C/EBPβ1/2和C/EBP?蛋白（图3C和D）。进一步分析显示，单独使用A或T能调节这些蛋白质表达，而ATI的联合应用则增强效果（图3C）。原癌基因c-Myc阻断了髓样细胞分化，其表达下调是粒细胞分化的关键。有趣的是，与单独或两两配对（图3 C和D）处理的细胞相比较，ATI处理组同时在蛋白质和mRNA水平的下调C- Myc。 RARβ2是迄今在其启动子包含最强的天然RA响应元素的RAR靶基