烟草RAPD分析影响因子初探和优化程序.PDFVIP

　　中国烟草科学 　　2001 , ( 1) :37 —40 　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　 烟草 RAPD 分析影响因子初探和优化程序 1 ,2 1 2 何川生 　张汉尧 　许介眉 ( 1 　中国烟草育种研究南方中心　玉溪　653100 　2 　四川大学生命科学学院) 摘　要 　以烤烟品种 Hicks 和 Speight G28 为材料 ,针对烟草 RAPD 分析中 PCR 过程的 Taq 酶 浓度、Mg2 + 浓度、退火温度、循环数、Primer 浓度、dNTP 浓度等因素进行了研究。结果表明 ,体系中 μ 含 0. 8 U Taq 酶 ,40 mmol/ L MgCl2 , 10 mol/ L 引物 ,3. 0 mmol/ L dNTP ,循环数为 40 ,退火温度 36 ℃ 效果较好。从而确立适合烤烟 RAPD 分析的 PCR 程序主要条件 ,为 RAPD 技术应用于烟草的品种 鉴定与品种资源研究奠定了基础。 关键词 　烤烟 　RAPD 　影响因子 　优化程序 ( ) 中图分类号:S572024 　文献标识码 :A 　文章编号 2001 　　在遗传育种中 ,遗传标记是重要工具。由于很 应因子设置不当 ,都会影响整个反应过程 ,或者改变 ( 多作物的形态标记、生化标记 如同功酶、蛋白质电 带型。因此系统地探索其最佳反应条件 ,优化反应 ) ( ) 泳 、细胞标记 染色体分带如 C 带、G 带等 数量有 体系是实验成败的关键。 限 ,很难对它们的基因组进行详细的分析 ,对品种资 以烤烟为材料,对 Taq 酶浓度、Mg2 + 浓度、退火 源的研究利用也受到限制。DNA 分子标记的出现 , 温度、反应循环数、Primer 浓度、dNTP 浓度等进行了 为基因组提供了几乎无限的标记位点。近年来的研 研究 ,建立了一个适合烟草的 RAPD 反应系统。 究表明 ,Williams 等[1 ] 提出的随机扩增多态性 DNA 1 　材料与方法 (Random Amplified Polymorphic DNA ,简称 RAPD) ,对 品种鉴定、群体和系谱分析、基因定位、多态性分析 1. 1 　材料与仪器 都是十分有效的。由于其具有快速有效、灵敏度高、 实验材料为 Hicks 和 Speight G28 两个烤烟品 操作简单安全、实验成本低等优点 ,是近年来运用最 种。dNTP 、Taq 酶购自 MBI 公司。随机引物为加拿 广泛的一种分子标记[2 ] 。自 1990 年以来 RAPD 技 大 Sangon 公司生产的十聚体核苷酸。PCR 仪为 Ge ( ) 术在丁香、甘蔗、葡萄、桂花、玉米、水稻等多种植物 neAmp PCR Perkin Elmer 公司 。 中广泛应用[3～8 ] 。但在 RAPD 反应过程中 , PCR 涉 1. 2 　模板 DNA 的提纯与制备 及的反应因子