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西南政法大学司法鉴定中心 作业指导书 文件编号 FSC07—TD—M-2 页号 第1页共9页 版次 第一版第1次修改 标题 STR 与性别位点基因型检测 审核人 王旭东 批准人 易旻 发布日期 2008年11月18日 西南政法大学司法鉴定中心 作业指导书 文件编号 FSC07—TD—M-2 页号 第2页共9页 版次 第一版第1次修改 标题 STR 与性别位点基因型检测 审核人 王旭东 批准人 易旻 发布日期 2008年11月18日 (2) 56℃保温15-30min； (3) 高速振荡5-10sec；100℃ 8min； (4) 高速振荡5-10sec, 10000-15000 r/min离心2-3min； (5) 取上清液用于扩增反应；2-8℃保存或冻存剩余DNA。 7.1.4从唾液斑中提取DNA： (1) 取9mm2唾液斑放入1.5ml离心管中，加1ml三蒸水于室温浸泡30min； (2) 用牙签搅动使载体细胞脱离载体，去除载体；10000-15000 r/min离心lmin; (3) 去上清仅留50μl，用无菌吸头吹打沉淀；加10 % Chelex 100 (50-100 mesh）至200μl, 56℃保温15-30min; (4) 高速振荡5-10sec；100℃ 8min; (5) 高速振荡5-10sec, 10000-15000 r/min离心2-3min；取上清液用于扩增反应；2-8℃保存或冻存剩余DNA. 7.1.5从精液中提取DNA: (1) 取3μl精液放入1. 5ml离心管内，加入200μl 10% Chelex 100(50-100 mesh) ; (2) 加入2μl 10mg/ml蛋白酶K和7μl lmol/L DTT，轻轻混匀； (3) 56℃保温30-60min，高速振荡5-10sec; (4) 10000-15000 r/min离心10-20sec; (5) 100℃ 8min; (6) 高速振荡5-10sec; 西南政法大学司法鉴定中心 作业指导书 文件编号 FSC07—TD—M-2 页号 第3页共9页 版次 第一版第1次修改 标题 STR 与性别位点基因型检测 审核人 王旭东 批准人 易旻 发布日期 2008年11月18日 (10) 100℃ 8min; (11) 高速振荡5-10sec, 10000-15000 r/min离心3min; (12) 取上清液用于扩增反应； (13) 2-8℃保存或冻存剩余DNA，再次使用时重复步骤11-12。 7.1.7从混合斑样本中提取DNA: (1) 取适量检材，剪碎后放入1.5ml离心管中，加1ml三蒸水； (2) 室温浸泡30min; (3) 用牙签搅动2 min，使载体细胞脱离载体，去除载体（注意：待基液中镜检到精子后再弃去载体）； (4) 10000-15000 r/min离心lmin; (5) 去上清仅留50μl，用无菌吸头吹打沉淀； (6) 取3μl悬液放于载玻片上，经染色后镜检； (7) 如果无上皮细胞检出，则直接从步骤13开始操作； (8) 加灭菌水150μl，再加2μl10mg/ml蛋白酶K，轻轻混匀； (9) 保温1-2hr以消化阴道上皮细胞（注：不得超过2hr，否则精子细胞也会被消化）； (10) 10000-15000 r/min离心5min; (11) 取150μl上清液与50μl 40 % Chelex 100(50-100 mesh)混合，以备女性DNA分析检验，见步骤14; (12) 悬浮沉淀于0.5ml精子洗涤液（10 mmol/L Tris-HCl, 10 mmol/L EDTA, 50mmol/L NaCl, 2 % SDS, pH 7.5)，振荡片刻，10000-15000 r/min离心5min，去上清仅留 西南政法大学司法鉴定中心 作业指导书 文件编号 FSC07—TD—M-2 页号 第4页共9页 版次 第一版第1次修改 标题 STR 与性别位点基因型检测 审核人 王旭东 批准人 易旻 发布日期 2008年11月18日 7.1.8从含精子的口腔拭子中提取DNA: (1) 用棉签刮拭口腔粘膜，取适量拭物放入1.5ml离心管中，加入1ml无菌双蒸水； (2)室温保温30min; (3) 用牙签搅动2min使细胞脱落，去除