泛素特异性蛋白酶18在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性的影响研究.pdfVIP

· 论 著 · 泛素特异性蛋白酶 18在肝癌细胞 中的表达 及其对生物学活性的影响研究 颜 伟 ，刘安文，蔡 婧，汪弋汀，曾小莉，陈雅洁，熊 乐，国畅阔 【摘要】 目的 检测泛素特异性蛋白酶 18(USP18)在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性 (细胞增殖 、细胞 克隆、细胞周期、细胞凋亡)的影响。方法 2013年7月一2014年7月选取5种肝癌细胞株 (HepG2、HepG2．2．15、 Hep3B、Huh一7、SMMC一7721)，采用实时荧光定量PCR (RT—PCR)和Westernblotting法分别检测USP18mRNA和 USP18表达水平 ，选择表达活性最强的细胞株进行小干扰 RNA (siRNA)转染。利用Lipofectamine 2000法将 USP18 siRNA转染肝癌细胞 ，分为正常组 、阴性对照组 、siRNA1组 、siRNA2组、siRNA3组。采用RT—PCR和Westernblotting 法检测干扰效率，四甲基偶氮唑蓝 (MTY)法绘制细胞生长曲线，平板克隆形成实验检测克隆形成率，流式细胞术检 测细胞周期，AnnexinV—FITC／PI染色流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 5种肝癌细胞株中USP18mRNA和USP18表 达水平 比较 ，差异有统计学意义 (P0．05)，其中Hep3B肝癌细胞株中USP18mRNA和USP18表达水平高于其他4种 肝癌细胞株 (P0．05)，故选取Hep3B肝癌细胞株进行后续实验。Hep3B肝癌细胞株转染USP18siRNA后48h，转染 效率达 (91．00±5．67)％。5组干扰效率比较，差异有统计学意义 (P005)；其中siRNA1组、siRNA2组、siRNA3 组干扰效率高于正常组和阴性对照组 (P0．05)。转染后 1、2、3d，siRNAI组、siRNA2组 、siRNA3组吸光度低于 正常组和阴性对照组 (P0．05)。siRNA1组、siRNA2组、siRNA3组克隆形成率低于正常组和阴性对照组，细胞凋亡 率高于正常组和阴性对照组 (P0．05)。5组细胞周期分布比较，差异有统计学意义 (P0．05)。正常组与阴性对照 组吸光度 、克隆形成率 、细胞周期分布、细胞凋亡率比较，差异无统计学意义 (P0．05)。结论 USP18在Hep3B肝 癌细胞株中的表达较高 ，USP18基因敲减可以抑制肝癌细胞增殖、减少细胞克隆、阻滞细胞周期进程，增加细胞凋亡。 【关键词】 肝肿瘤；泛素特异性蛋白酶；细胞增殖；细胞凋亡 【中图分类号】R735．7 【文献标识码】A doi：10．3969／j．issn．1007—9572．2015．33．013 颜伟 ，刘安文，蔡婧，等 ．泛素特异性蛋白酶 18在肝癌细胞中的表达及其对生物学活性的影响研究 [J]．中国 全科医学，2015，18 (33)：4077—4083．[www．chinagp．net] YanW ，LiuAW ，CaiJ，eta1．ExpressionofUSP18inhepatomacarcinomacellsanditsinfluenceonbiologicalactivity [J]．ChineseGeneralPractice，2015，18 (33)：4077—4083． ExpressionofUSP18inHepatomaCarcinomaCellsandItsInfluenceonBiologicalActivity YAN Wei，LIUAn—wen， CAIring，eta1．DepartmentofSixthInternalMedicine，JiangxiCancerHospital，Nanchang330006，China A【bstract】 Objective TodetecttheexpressionofUSPI8inhepatomacarcinomacellsanditsinfluenceonbiological activity (cellproliferation，cellclone，cellcycleandcellapoptosis)．Methods Selected5kindsofhepatomacelllinesfrom July2013toJuly2014(HepG2，HepG2．2．15，Hep3B，Huh一7andSMMC一7721)．RT