活血通痹片水提醇沉工艺探究.docVIP

活血通痹片水提醇沉工艺探究摘要　目的：筛选并优化活血通痹片提取醇沉工艺。方法：以干膏得率和提取物中芍药苷含量为考察指标，采用正交设计多指标综合评分法优化提取工艺。单因素考察不同醇沉浓度对芍药苷保留率的影响。结果：通过正交试验优化确定的提取条件为：药材饮片第一次以10倍水，第二次8倍，提取2次，每次90min。醇沉浓度为70％。结论：该制备工艺合理，有效成分保留率高。 关键词　芍药苷 活血通痹片是广东第二中医院院内制剂，由桃仁、红花、赤芍等十三味药组成，具有补肾、活血化瘀、除湿通络等功效，主治肾虚血瘀所致腰膝疼痛，腰肌劳损，肢节屈伸不利等病症。赤芍为毛茛科植物芍药Paceonia lacti flora Pall.的干燥根。赤芍作为本方臣药，具清热凉血，散瘀止痛之功效。因此，将赤芍中芍药苷含量作为指标性成分，结合提取工艺浸膏得率为考察指标，采用正交试验设计对其提取条件优选，采用单因素考察法对醇沉工艺进行优化，为生产工艺参数的确定提供依据。 1　仪器与试药 Agilent 1200高效液相色谱仪：G1316A检测器、G1312A二元泵、G1329A柱温箱、G2170A数据处理系统(Agilent，美国)；XS2055分析天平(梅特勒，瑞士)，药材饮片(广州致信药业有限公司，批，芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110736-200901)，水为超纯水，甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。 2　方法与结果 2，1　干膏得率的测定方法　取各正交实验号浓缩液10ml于干燥蒸发皿中水浴蒸干，照干燥失重测定法(中国药典2010年版一部附录IXG)测定，计算干膏得率。 2，2　芍药苷含量测定 2，2，1　对照品制备：利用分析天平精密称取已干燥的芍药苷对照品5.12mg，置于50ml容量瓶，甲醇溶解定容至50ml，即芍药苷为0.1024mg／ml。 2，2，2　样品制备及测定：取各正交实验号浓缩液5ml，置干燥蒸发皿中80℃水浴蒸干，甲醇溶解定容至50ml。同法制备阴性样品。 2，2，3　色谱条件：色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18柱(4.6×150mm，5μm)；流动相：甲醇：0.1％磷酸水(14：86)；检测波长230nm，柱温25℃。将芍药苷对照品分别进样，2、3、4、6、8、10μl，由图1芍药苷在该色谱条件下峰形良好，其中芍药苷在204.8～1024ng范围内线性关系良好，回归方程为：峰面积Y=1-2.6122678，r=0.99995(见图2)将阴性样品和待测样品进样检测，结果表明，阴性样品色谱在芍药苷相应的保留时间上无色谱峰(见图3)，样品中芍药苷色谱峰分离度良好(图4)。 2，2　吸水率考察　按处方称取的药材，加10倍量的水浸泡，每隔1个小时观察一次浸透心情况，直至药材全部浸透，滤过，量取滤液体积，计算药材吸水率，求得药材吸水率为192.3％。 2，3　正交设计优选提工艺　活血通痹片采用水煎煮提取工艺，在单因素试验考察的基础上，采用正交试验优化提取工艺，选取加水量(A)，提取次数(B)，提取时间(c)，作为考察因素，各取三水平，进行L9(34)正交试验，筛选最佳工艺条件，因素水平表见表1。赤芍作为方中臣药，芍药苷为其主要成分，本试验以高效液相法测定提取液中芍药苷的含量，作为评价指标之一，权重系数定为0.6；而作为有效成分煎出间接控制的一个指标，药效物质提取的多少以干膏得率为考察指标，权重系数定为0.4，以两指标的结果进行综合评分。 试验时按处方量称取药材、饮片，按正交试验设计各实验号进行提取，滤过，滤液减压浓缩，定容至200ml，备用。分别按2.2项下方法测定干膏得率、芍药苷含量，采用以下公式： Y=(40／得膏率max)×得膏率+(60／(芍药苷含量)max)×(芍药苷)含量 进行综合评分，用SPSS11.0统计软件进行数据处理，对评分结果作直观分析和方差分析，以判断各因素对提取效果的影响程度，筛选出在该试验条件下最优的提取条件，试验安排及结果见表2，方差分析结果见表3。 由直观分析可知，影响提取工艺效果的因素顺序为：提取时间(B)提取次数(c)加水量(A)，最佳工艺组合为A283C2。方差分析结果显示，提取次数和提取时间均对提取结果具有显著性影响，而加水量对试验结果的影响无显著性影响。由于处方药材吸水率为192.3％，综合考虑缩短生产周期，降低生产成本等综合因素，选择第一次加水10倍量，第二次加水8倍，提取2次，每次提取90min作为水提取工艺参数。 2，4　验证实验　为确定该工艺条件的稳定性，以筛选的最佳条件，验证3批，结果见表4。验证试验结果与正交试