愈伤组织中的形态发生.PPT

愈伤组织的培养 第一节 愈伤组织的诱导和分化 第二节 愈伤组织中的形态发生 第三节 人工种子 第一节 愈伤组织诱导和分化 已有特定结构与功能的植物组织，在一定的条件下，细胞改变了原来的分化状态，失去原有的结构和功能，转变为具有分生能力的细胞，这个过程成为脱分化。植物各种器官的外植体在离体的条件下，细胞经过脱分化等一系列过程，转变为分化细胞，继而转变成一种能迅速增殖的无特定结构和功能的细胞团，成为愈伤组织（callus）。 矮牵牛叶片诱导的愈伤组织 一．愈伤组织的诱导 1．一般认为，植物各器官和组织均有发生愈伤组织的可能性。而且还认为愈伤组织诱导成败的关键不在于植物材料的来源，主要在于培养的条件。其中植物生长调节剂是诱导愈伤组织成败的极为重要因素。用于诱导愈伤组织形成的常用激素是2.4-D、IAA、和NAA，所需浓度在0.01~10mg/L范围内；常用的细胞分裂素是激动素、玉米素和6-BA，使用的浓度范围在0.1~10mg/L。 2．很多情况下，单独使用2.4-D就可成功地诱导愈伤组织的发生，不过要注意使用的浓度，过低愈伤组织生长缓慢，过高愈伤组织的生长完全受到抑制。生长素和细胞分裂素对保持愈伤组织的快速生长是必要的，特别是两者使用时能强烈刺激愈伤组织的形成。 3．不同植物材料不同要注意使用不同种类的激素和不同的浓度。 不同激素条件下水稻盾片愈伤组织的诱导情况 二．愈伤组织的形成 愈伤组织的形成大致经过起始期、分裂期和形成期。 1．起始期。是指细胞准备进行分裂的时期，当外植体已分化的活细胞在外源激素的作用下，通过脱分化启动而进入分裂和形成愈伤组织。细胞内的RNA含量明显增加，细胞核也变大。 2．分裂期。分裂期的特征表现为外层细胞出现分裂，使得外层细胞变小并逐渐回复到分生组织状态，在这个过程中细胞分裂进入最旺盛时期，细胞体积最小，核仁和细胞核较大，RNA含量最高。 3．形成期。进入形成期的特征是细胞大小趋于稳定，细胞分裂从分裂期的周缘细胞分裂为主转向了内部的组织，随着愈伤组织表层细胞分裂的停止和缓和，内部深处的细胞开始分裂并形成象维管束或类似分生组织组成的鸟巢状结构。 所要注意的是，不同植物来源的愈伤组织，在质地、形态和物理性状方面均有明显的差异。同一植株不同器官形成愈伤组织的能力不同。 第二节 愈伤组织中的形态发生 愈伤组织通过再分化形成再生植株的方式主要有三种： （1）先产生芽后在茎的基部长根； （2）先长根再长芽； （3）愈伤组织的不同部位分别形成根和芽。 一．愈伤组织器官的形成 一般愈伤组织开始分化时，由大小不等的细胞开始逐渐形成大小均匀的细胞，保持相对稳定状态。在芽分化时，从愈伤组织的表层开始，属外起源；但根发生在愈伤组织的深处，与整体植株发生类似，是内起源。愈伤组织的外部形态业随分化而改变，一般右疏松转向紧密。 1.植物生长调节物质在分化过程中的作用是极为明显的，合适的植物生长物质配比在器官分化中起着重要的作用。如仙人掌科的金牛掌茎段培养中，当6—BA的浓度（单位为mg·L-1）的50～100倍时，茎段的愈伤组织可以再分化出仔球，而6—BA浓度过高（150倍）或过低（10倍）则无仔球形成。大量试验结果表明，大多数植物组织或器官的再生作用符合器官分化的植物激素控制理论，即当生长素与细胞分裂的比例高时，愈伤组织仅形成根，生长素与细胞分裂素的比例小时则产生苗，而两种激素的比例适中时，则产生无结构的愈伤组织 。 2.在许多木本植物愈伤组织形成再生苗的培养过程中，常常时将诱导不定芽与诱导根两步完成。即首先利用分化培养基（含有6—BA，CPPU，KT）使愈伤组织形成不定芽。增加繁殖系数；当不定芽长大出现叶片后，再将伸长的苗从基部切下转入含生长素类（如IBA，NAA）的生长根培养基上培养诱导根生成。这是一种较为常见的器官发生方式。如研究芦荟的无性快速繁殖时，首先用MS培养基附加不同的6—BA，促进不定芽的形成（表5—3），然后将抽枝的小植株转移到MS附加不同浓度的NAA培养基上培养，诱导根的发生和生长。 二．体细胞胚胎发生 1.体细胞胚。大量实验证实，植物体细胞具有成胚的潜力，由体细胞发育成胚状体（somatic embryo）。在含有椰子汁的培养基上，石龙芮花器官各部分以及体细胞组织都能形成愈伤组织，之后三周内，在愈伤组织上出现大量胚，这些胚是由愈伤组织外层细胞以及深部细胞起源的。后来证实通过细胞培养或由愈伤组织得到的单细胞，以及原生质体培养后，都能形成胚性愈伤组织（embryonic callus）。在离体或活体条件下，体细胞经原胚期、球形胚期、心性胚期、鱼雷胚期和子叶期等阶段形成的胚叫体细胞胚状体（somatic embryoid）。从愈伤组织或外植体的表面产生胚状体的