第十一动物基因工程.pptVIP

(二)限制性内切酶的命名 (三)限制性内切酶分类 (四)Ⅱ型限制性内切酶的基本特征 常用限制性核酸内切酶的特性 (五)Ⅱ型限制性内切酶的主要用途 1、重组DNA分子 2、绘制物理图谱 二、DNA聚合酶 三、DNA连接酶(DNA ligase) 重要的工具酶 第三节 基因克隆常用的载体 载体的种类(按用途) 一、质粒 (plasmid) (二) 质粒的类型 (三) 理想质粒载体的基本要求 pBR322质粒 pUC系列质粒 λ噬菌体两种生长途径 五、动物病毒 SV40病毒 2、对猴细胞的裂解侵染 第五节 DNA体外重组与基因转移 第六节?? 重组体的鉴定与筛选 一、遗传检测法 (二) 插入失活选择法 二、重组质粒的快速提取与酶切鉴定 三、核酸分子鉴定法 2、原位杂交 3、Northern印迹分析 四、Western印迹杂交 五、序列分析法 第七节 转基因动物技术 二、转基因动物技术的一般步骤 三、?导入基因的方法 四、转基因动物检测的方法 五、基因的选择与转基因动物的研究现状 (二) 转基因动物的研究现状 2、改变奶蛋白成分和性质的设想 3、利用家畜生产药物蛋白的研究 六、转基因动物的应用前景 第八节 习 题 一、转基因动物技术的概念 动物转基因技术：将外源DNA导入性细胞或胚胎细胞，并产生出带有外源DNA片段动物的一种技术。 1981年，Gordon和Ruddle首次用显微注射法把外源基因导入小鼠受精雄核。 选择能有效表达的蛋白质； 克隆与分离编码这些蛋白质的基因； 选择能与所需组织特异性表达方式相适应的基因调控序列； 把调节序列和结构基因重组拼接，并在培养细胞中预先检验其表达情况； 把拼接的基因引入到受精卵的细胞核中； 把引入后的受精卵移植到子宫，完成胚胎发育； 检测幼畜外源基因的整合、表达以及在后代中的传递情况。 (一) 显微注射法? (二) 精子载体法 精子载体法：是将成熟的精子与外源DNA的载体共同孵育，使精子携带外源DNA，受精后外源DNA整合至染色体中。 影响因素：①精子吸附外源DNA需特定的时期； ②精子吸附DNA时，精子的活性；③DNA的性质。 (三) 胚胎干细胞介导法 胚胎干细胞(embryonic stem cell，ES)：是从胚泡内细胞团取出，在体外培养建立的，保持正常核型的多潜能细胞。 (四) 染色体片段显微注入法 染色体介导法：是指从人或动物染色体上割取特定的染色体片段(M期)或分离出来之后，以其为媒介将外源基因注入动物早期胚胎中，以获得外源DNA的动物。 特点：成果率很低(0～0.002%)；可转移超大型外源DNA(＞1000kb)。 DNA的提取 斑点杂交和PCR扩增 Southern杂交 Northern杂交 表达产物的检测 (一) 转入基因的选择 与机体代谢调节有关的蛋白基因，如生长激素基因等； 抗性基因，如抗逆、抗病等； 经济性状的主效基因，如猪和绵羊的高繁殖力基因等； 治疗人类疾病所需的蛋白质基因。 1、提高动物生长、生产性能的研究  提高K酪蛋白的含量 引入人奶蛋白 人的血红蛋白基因转入猪(3000$/头) 人体清蛋白转入山羊(20000～25000$/头) 动物克隆技术 (Animal Cloning Technology) ??????????????????????????????????????? 1997年2月22日，英国“Nature”刊登了爱丁堡罗斯林研究所维尔穆特的研究成果，即“多莉”羊的克隆成功，从此震惊了世界。 Creating Dolly！ 多莉的生命历程 1998年4月与威尔士山羊戴维产下邦尼，证明了克隆动物也能生育。 2003.2.14，苏格兰向外界宣布：多莉因早衰并患有肺炎，被迫实施了安乐死。由于早衰问题，人们怀疑“多莉是穿着羔羊服装的老羊” 。 1、引物 RNA DNA 2、酶 DNA聚合酶Ⅲ TaqDNA聚合酶 3、模板的解链方式 酶和蛋白质作用 热变性 4、温度 37℃ 3个温度 5、校对功能 完善 易突变 6、循环 1次约20min 1次4～6min PCR与大肠杆菌DNA复制的差异 大肠杆菌DNA PCR (三) PCR引物