生物技术药物的质控体系—质量标准研究内容检定方法质控标准.DOCVIP

生物技术药物的质控体系—质量标准研究内容 检定方法、质控标准 理化性质：外观（形状、颜色、气味）、pH 均一性：纯度、浓度 鉴别 结构确证 效价：生物学活性、免疫学活性 残余杂质：产品、工艺、环境相关的杂质 起草、制定《制造与检定规程》 研究建立国家标准品或参考品 重组蛋白质药物质量标准研究 效价：生物学活性与比活性 蛋白质纯度 蛋白质含量 理化性质鉴定（部分非常规） 残余杂质 安全性及其它项目 一 生物学活性及比活性测定 (一) 检测意义 获取准确的效价信息，保证产品有效 效价：有效性指标，反映药品效力 生物学活性才能真实反映生物技术药效价 原因：生物制品分子大、结构复杂、不稳定，使得重量与效价不一致 生物制品技术药：~单位（U、AU、IU） （二） 生物学活性测定方法分类 1、动物基础的活性测定 离体动物器官法：脑利钠肽的兔主动脉 体内测定法： EPO的小鼠网织红细胞 2、细胞基础的活性测定 促细胞生长法：大多数细胞因子类 抑制细胞生长法：细胞毒素、血管抑制剂 间接保护细胞法：IFN保护WISH 3、酶学基础的活性测定：重组酶类 4、受体-配体、抗原-抗体结合基础的活性测定： 抗原决定簇与活性中心常不一致 （三）生物学活性测定方法选择 1、细胞培养法＞离体器官法＞体内法 2、细胞染色标记方法： MTT ＞3H-Thymidine ＞流式细胞仪 （测细胞周期、凋亡） 3、定量法＞半定量法＞定性法 4、生物学活性不一定与临床药效类型一致 工艺稳定、测生物活性特别复杂时，可替代。 如rh-GH用HPLC （四）生物学活性测定（见药典附录ⅩC） 1、样品：原液、成品 2、方法：如上述（好好研究？？？？） 3、标准： 不同生物活性测定方法的规定标准 测定方法 规定标准 动物基础的活性测定 70%-130%标示量 细胞基础的活性测定 80%-120%标示量 酶学基础的活性测定 85%-115%标示量 结合反应的活性测定 85%-115%标示量 （五）蛋白质药物的比活性（见分生实验册77页）？？？ 1、样品：原液 2、定义与计算： 比活性：单位重量蛋白的活性单位数（IU/mg) 3、标准：不小于。。。IU/mg 4、意义： 1）真实反映有活性的蛋白质所占的比例 厂家间、表达系统间、批间比较 2）便于配制成品 二 蛋白质纯度检查 样品：原液 方法：必须采用二种方法测定 非还原SDS法 HPLC法 标准：纯度均须达到95%或98%以上 非还原SDS法测定纯度（见药典附录ⅣC） SDS：据分子大小分离 样品处理：样品不加β-ME或DTT 二硫键未打开，反映单体、二聚体或多聚体情况 染色方法与上样量 银染: 5ug（检测限为1-10ng） 考马斯亮蓝R-250：10ug（检测限为0.1ug） 定量方法：凝胶扫描 标准：无明显杂带，纯度≧95%或98% HPLC法测纯度？？？（见药典附录ⅢB） 分析柱：反相柱、离子柱、分子筛 应尽量采用反相柱或离子柱 应注明采用的分析柱性质 上样量：5ug 标准：出峰时间正确 纯度：≧95%或98% 三、蛋白质含量测定(见药典附录ⅥD) 样品：原液、成品 方法： *Folin-酚试剂法（Lowry法）：（见分生实验册67-73页） 简便、灵敏、优先采用，灵敏度：5-100ug/ml *染色法（Bradford法）： 考马斯亮蓝G-250，简便灵敏， 25-200ug/ml BCA(二喹啉甲酸)法： 操作简单，比Lowry法快4倍且更加方便，准确灵敏：20~200 ug/ml，微量BCA的测定范围在0.5~10 ug/ml。经济适用 ，抗试剂干扰能力比较强。 紫外分光广度法： 用于原液比活性计算和成品规格控制 四、蛋白质药物理化性质鉴定 （一）特异性鉴别试验 1、样品：原液和成品 2、方法：免疫印迹法 Western Blot、 Dot Blot 3、标准：应该阳性 （二）相对分子量测定 1、样品：原液 2、方法：还原型SDS（见分生实验册51页、见药典附录ⅣC）、质谱法 3、标准： 1）理论值±10%范围 2）批与批间一致 （三）等电点测定（见药典附录ⅣD） 1、样品：原液 2、方法： IEF：常规等电聚胶电泳（见分生实验册55-57页） CE：毛细管电泳 3、标准： 1）有明显主带 2）