五种6，7-呋喃香豆素对大鼠肝微粒体细胞色素P4501A2和2E1活性影响.pdfVIP

五种6，7．呋喃香豆素对大鼠肝微粒体细胞色素 P4501A2和2El活性的影响 研究生： 李超 专业： 药理学 导 师： 王德才教授 中文摘要 目的：通过体外孵育反应体系，观察五种6，7．呋喃香豆素类化合物(补 骨脂素、香柑素、异茴芹素、欧前胡素、异欧前胡素)对大鼠肝微粒体细胞 色素P450(eytochrome 合物作用的强弱，为指导临床合理用药和新药研制开发提供理论基础。 方法：①采用健康成年雄性Wistar大鼠，利用CaCL2沉淀法制备大鼠肝 微粒体，并常规测定大鼠肝微粒体蛋白含量、CYP总量和细胞色素b5 (eytochromeb5，Cytb5)含量等指标。②以咖啡因和氯唑沙宗分别作为CYP 1A2和CYP2E1的探针药，以安替比林为内标，用高效液相色谱法同时检测 体外反应体系中两种探针药浓度的变化，并进行方法学的考察。③体外反应 体系由肝微粒体悬液、Tris缓冲液和辅助因子溶液组成，探针药经CYP代谢 应体系产生；并在体外37C孵育时间、肝微粒体蛋白浓度和探针药浓度等三 方面进行体外反应条件的优化，确定最佳反应条件。④在体外反应体系中五 种6，7．呋喃香豆素类化合物和阳性对照药氯霉素的终浓度为1．0，2．0，4．0， 8．0，1 6．O“g·mL一，同时设立空白对照管／组；各管加入探针药后，置37C水 浴中孵育反应40min后加入冰冷氯仿液震荡，终止反应并萃取剩余的探针药； 以HPLC法检测探针药的剩余量，计算探针药转化率；重复实验操作6次。 以各组间探针药转化率的不同，评价五种试药对大鼠肝微粒体CYPlA2和 2El活性的影响。 8．265士2．72 wet， 结果：①正常大鼠肝微粒体蛋白含量为1 mg·g～Liver l2 56、O．234士0．1 CYP总量和Cytbs含量分别为0．439士0．1 nmol‘mg—Protein。 外检测波长280nm，咖啡因、氯唑沙宗和内标物安替比林的色谱峰分离完全， 系数为55．91％，日问差的变异系数为51．90％，低、中、高三个浓度的加样回 收率为96．0％、101．6％、96．2％。③体外反应体系的条件选择是：37℃孵育 反应的时间为40min，微粒体的蛋白浓度为1．0mg·ml～，咖啡因和氯唑沙宗 的终浓度为8．099·ml～。④在空白组中咖啡因和氯唑沙宗的平均代谢转化率 著抑制两种探针药的代谢转化率(均P0．05)，并呈良好的剂量依赖性。5 种6，7．呋喃香豆素试药组两种探针药的代谢转化率均有不同程度的减少， 除少数低浓度点以外，与空白组比较均有显著地统计学意义，在总体上呈现 一定的量．效关系。在同等质量浓度下，与氯霉素相比较，异欧前胡素在2．0， 柑素在2．0，4．0，8．0pg·mL。1浓度时氯唑沙宗的转化率则显著小于氯霉素 (P0．05)；异茴秦素在各浓度点两种探针药的转化率均高于氯霉素 (P0．05)。 ．结论：①应用CaCl2沉淀法制备的大鼠肝微粒体能满足体外药物代谢研究 的需要。②建立的以安替比林为内标，同时检测咖啡因和氯唑沙宗的反相高 效液相色谱法，操作简便，灵敏、可靠，稳定性和重现性好。③5种6，7． 性抑制作用。对CYPlA2的抑制作用表现为异欧前胡素欧前胡素补骨脂素 ≥香柑素异茴芹素；对CYP2E1的抑制作用，为欧前胡素≥香柑素异欧前胡 素≥补骨脂素异茴芹素。异欧前胡素对CYPlA2的抑制作用以及欧前胡素和 和CYP2E1的抑制作用明显弱于氯霉素。 关键词：6。7一呋喃香豆素类化合物； 细胞色素P4501A2； 细胞色素 P4502E1；咖啡因； 氯唑沙宗； 药物代谢 2 THE EFFECTSOFFIVE