蔬菜中硫代葡萄糖苷.doc

蔬菜中硫代葡萄糖苷的比较分析 绪论： 硫代葡萄糖苷是广泛存在于油菜、甘蓝、芥菜及萝卜等十字花科植物中的一类含硫次级代谢产物。目前已鉴定出的天然硫代葡萄糖苷有100多种。GS在组成上都有一个相同的母体，区别在于支链R基团的结构不同。根据R基团的结构特征，可将硫苷分为三大类：脂肪族（第一类）、芳香族（第二类）和吲哚型（第三类）。 硫苷本身是一类稳定的化合物，但在芥子酶或胃肠道中的细菌酶的催化作用下会发生降解并生成多种降解产物。硫苷与芥子酶隔离共存于植物体内。当植物的器官受损或对植物加工时他们相接触导致硫苷降解。硫苷和它的降解产物都具有活跃的生物化学特性。 在食品中赋予产品特殊的风味，从而影响食物的适口性。如芥末辣根的辛辣味，雪菜味等。 硫苷的降解产物如OZT及硫氰酸盐等，这些降解产物能抑制甲状腺素的合成和吸收，从而引起甲状腺肿大。 HPLC法主要用沸腾的甲醇溶液提取样品中的硫代葡萄糖苷，并将提取的GS溶液用离子交换柱进行预处理，然后用配备紫外检测器的反相高效液相色谱（RP-HPLC）仪测定。在此方法中，选用了硫代葡萄糖苷类化合物中的一种，即带有一个结晶水的黑芥子硫苷（相对分子质量415.49）作为定量分析的内标物。经过多个国际权威实验室的协同试验，共同确定了16种以上硫代葡萄糖苷类化合物的仪器保留时间，将色谱图上各类硫代葡萄糖苷的峰面积根据内标物峰面积校正，计算得到其单独含量，累加得到硫代葡萄糖苷类化合物的总量，均以umol/g为单位。该方法已于1992年被确认为国际标准(ISO),目前是加拿大谷物委员会(CGC)谷物研究实验室(GRL）出具加拿大双低油菜籽年度质量分析报告时所使用的基准方法。这种方法的优点是能对蔬菜样品中的各种GS进行定性和定量分析。本实验介绍分光光度法测定GS总量的方法—二硝基水杨酸法测定所产生的葡萄糖量，计算出GS的含量。 仪器及试剂： 1.1实验材料 (1)3,5-二硝基水杨酸、酒石酸钾钠、氢氧化钠、苯酚、无水葡萄糖、氟化钠、醋酸铅、硫酸钠。 (2)市售大头菜、油菜、白萝卜 1.2仪器 (1)722分光光度计；(2)恒温水浴锅；(3)电炉；(4)刻度比色管；(5)容量瓶；(6)漏斗；(7)研钵；(8)温度计；(9)砧板、菜刀。 实验步骤 1．标准曲线的制作 1.1 3,5-二硝基水杨酸的配置 取酒石酸钾钠182g及用3,5-二硝基水杨酸7g，加热溶解于500mL蒸馏水中，加入15g氢氧化钠，溶解后再加4g苯酚及1g无水亚硫酸钠，溶解后定容至1000mL，放置一周后备用。 1.2 葡萄糖标准溶液的配置 取0.100g无水葡萄糖，蒸馏水溶解并定容至100mL，此溶液每mL含葡萄糖1.0mg 1.3 葡萄糖标准曲线的绘制 取6支10mL刻度试管，依次加入葡萄糖标准溶液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5mL,用蒸馏水补足至1mL，加入3,5-二硝基水杨酸溶液3mL混匀，于沸水浴中保温10min（使其完全反应）后取出，冷却至室温后定容至10.0mL，于530nm处测吸光度值，以葡萄糖量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制标准曲线。 2．样品的酶解 选取大头菜表皮、中间、中心部位，油菜的根、茎、叶部位，萝卜的表皮、中间、中心部位，准确称取研磨每种样品0.500g两份，分别置于两支25mL刻度试管中，各加氟化钠0.1g。在一支试管中加沸水20mL,立即加热至沸并保持10min。在另一支试管中则加入35~38度蒸馏水20mL，置37度水浴中保温酶解1小时，使GS在芥子酶作用下水解。完成酶解后加热至沸并保持10min。 2.3 GS总量的测定 在两支试管中分别加入6滴中性醋酸铅，以沉淀其中的蛋白质及色素类物质，过量的醋酸铅应用饱和的硫酸钠溶液消除。最后，加蒸馏水定容至25mL，用滤纸过滤至试管中。取滤液各0.5，按葡萄糖标准曲线绘制方法，分别测定其吸光度。 3．GS总量的测定 3.1标准曲线（m=0.5对应的吸光度A=1.068为可疑值，舍去） 表1 葡萄糖标准曲线 质量（mg） 0 0.1 0.2 0.3 0.4 吸光度 0 0.133 0.244 0.543 0.774 图1.葡萄糖标准曲线3.2样品数据整理表样品吸光度原始数据 样品 吸光度A值 灭酶管 酶解管 油菜0.185 油菜茎 0.211 0.521 油菜叶 0.014 0.303 白萝卜根 0.313 0.405 白萝卜皮 0.0.288 白萝卜心 0.300 0.410 大头菜表皮 0.313 0.405 大头菜中部 0.133 0.242 大头菜心 0.038 0.137 表2.样品吸光度对应质量 样品 灭酶管吸光度对应质量m（mg） 酶解管吸光度度对应质量m2（mg）