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抗药性突变株分离
试验2 抗药性突变株的分离;二、基本原理
1 微生物产生抗药性的原因
1) 基因突变：是微生物DNA分子的某一特定位置的特定结构改变所致，导致细菌发生不同的生理、生化变化, 与药物的存在无关。
2)耐药性基因转移: 耐药质粒,转座子, NDM-1 (金属 β-内酰胺酶):对β-内酰胺类抗生素（青霉素类抗生素和头孢菌素）、大环内酯类抗生素（红霉素、罗红霉素、阿奇霉素等）、氨基糖苷类抗生素（庆大霉素、链霉素等）、四环素类抗生素（四环素、强力霉素、金霉素等，替加环素除外）、喹诺酮类抗菌药（环丙沙星、司帕沙星等）、磺胺类药、利福平等这些常用抗生素有极强的耐药性 .;2 抗生素诱导的微生物抗药性产生;三、器材
1. 菌株 大肠杆菌：Strs
2. 培养基 LB液体培养基
3. 溶液或试剂 链霉素
3. 仪器或其他用具 1ml 无菌吸管，盛有70﹪
乙醇的烧杯，玻璃涂棒，水浴锅等。
;四、操???步骤
1．菌种培养
接种大肠杆菌于盛有5mL LB液的试管中，
37℃震荡培养24h。
2. 梯度平板制作
（1）在热水中溶化LB琼脂培养基。
（2）倒10 mL已溶化的LB于无菌平板，并将平
板一端垫起，使培养基在倾斜的位置凝固。;（3）在已凝固的平板底部高琼脂的一边标上“低”，水平放置，倒入100μg/mL链霉素（在培养基温度下降至50 ℃ 左右加入）的LB琼脂。过夜，以便于抗生素渗透，获得0μg/mL至100μg/mL链霉素梯度平板。
3. 涂布和培养（第2次）
用1 mL无菌吸管吸取0.2 mL大肠杆菌培养液Strs
加到梯度平板上。用无菌玻璃图棒将菌液涂布到整个平板表面。平板倒置于37℃培养48h。
;4. 抗性突变菌株分离（第3次）
---选择1-2个生长在梯度平板中部的单个菌落，用无菌接种环接触单个菌落朝高药物浓度的方向划线。平板倒置于37℃培养48h。
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