蛋白质工程考试复习资料.docVIP

名解 蛋白质工程：蛋白质工程是以蛋白质的结构与功能的关系研究为基础，利用基因工程技术对现存蛋白质加以改造，组建成新型蛋白质的现代生物技术。 蛋白质超二级结构：相邻的二级结构单元组合在一起，彼此相互作用，形成规则排列的组合体，以同一结构模式出现在不同的蛋白质中，这些组合体称为超二级结构，或结构模体。 结构域：指二级结构和结构模体以特定的方式组织连接，在蛋白质分子中形成两个或多个在空间上可以明显区分的三级折叠实体。结构域是蛋白质折叠中的一个结构层次，介于超二级结构和三级结构之间，是蛋白质三级结构的基本单位，也是蛋白质功能的基本单位。 分子伴侣：是一类相互之间有关系的蛋白分子，能识别正在合成的多肽或部分折叠的多肽并与多肽的一定部位相结合，帮助这些多肽转运、折叠或组装，但其本身并不参与最终产物的形成。 定向进化：在实验室中模仿自然进化的关键步骤-突变、重组和筛选，在较短时间内完成漫长的自然进化过程，有效地改造蛋白质，使之适于人类的需要。这种策略只针对特定蛋白质的特定性质，因而被称为定向进化。 第二遗传密码：氨基酸顺序与蛋白质三维结构之间存在着对应关系，人们称之为第二遗传密码或折叠密码。 蛋白质的化学修饰：凡通过活性基团的引入或去除，而使蛋白质一级结构发生改变的过程统称为蛋白质的化学修饰。 基因突变的概念：基因突变是指由于DNA碱基对的置换、增添或缺失而引起的基因结构的变化(如疾病过程和药物效应)，以及基因表达调控的机制的学科。 双向电泳：是等电聚焦电泳和SDS的组合，即先进行等电聚焦电泳（按照pI分离），然后再进行SDS（按照分子大小），经染色得到的电泳图是个二维分布的蛋白质图。DNA中则含有该蛋白的结构基因。 蛋白质打靶技术：蛋白质打靶是一种研究蛋白质功能的新方法。由于其高度的特异性和可控性，正越来越广泛地应用于神经功能的研究中。它采用了一种被称为免疫外源凝集素的新工具，这是一种通过DNA重组技术而获得的IgG的Fc片段和目标受体胞外域的融合蛋白。这使其保持了天然的与配体结合的特异性和亲和力，正是通过这种结合而发挥影响受体功能的作用。 蛋白质的分子设计：蛋白质的分子设计就是为有目的的蛋白质工程改造提供设计方案，确保获得比天然蛋白质性能更加优越的新型蛋白质。 单克隆抗体：由单个B细胞克隆或其杂交瘤细胞克隆产生的，只针对一种抗原决定簇的抗体pH梯度中进行 蛋白质的分离和分析。 激光捕获显微切割技术：LCM是直接从冰冻或石蜡包埋肿瘤组织切片中获取细胞。它是用乙烯醋酸盐聚合体膜覆盖在被选择的细胞上，然后用红外激光熔化膜，这时膜与组织在目标位置牢固结合，当膜被提起时，仅目的细胞留在膜上。 简答 什么是蛋白质的变性？哪些因素能引起蛋白质变性？ 蛋白质分子受到某些物理因素和化学因素的影响时，会引起蛋白质天然构象的破坏，导致生物活性的降低或完全丧失，这一过程称为变性。 引起蛋白质变性的因素：物理因素：热、紫外线、高压； 化学因素：有机溶剂、脲、胍、酸、碱。 什么是蛋白质的分子设计及分子设计的分类和目标？ 蛋白质的分子设计就是为有目的的蛋白质工程改造提供设计方案，确保获得比天然蛋白质性能更加优越的新型蛋白质。主要目的有两个：一是为有目的的蛋白质工程改造提供设计方案和指导性信；；二是探索蛋白质的折叠机理。分子设计的分类：定点突变或化学修饰法、拼接组装设计法、从头设计全新蛋白质。 3、蛋白质修饰的反应类型及修饰部位？ 蛋白质修饰的反应类型：烷基化反应、酰化反应、氧化还原反应、芳香环取代反应。 修饰部位：巯基的化学修饰、氨基的的化学修饰、羧基的化学修饰、二硫键的化学修饰、其他侧链基团的修饰。 4、蛋白质分离纯化的一般步骤？ （1）选择实验材料（2）实验材料的预处理（3）蛋白质的提取（4）蛋白质粗分级（5）蛋白质细分级（6）蛋白质的鉴定 5、离子交换层析的主要原理？ 原理：蛋白质是两性分子，在一定的pH条件下带有电荷，不同的蛋白质所带有电荷的种类和数量不同， 因此它们与带电的凝胶颗粒间的电荷相互作用不同。这样，当蛋白质混合物流经带电凝胶时，电荷吸引作用小的蛋白质先流过，而电荷吸引作用大的蛋白质后流过凝胶，从而把不同的蛋白质分开。 6、SDS的原理？双向电泳的原理？ SDS的原理：聚丙烯酰胺凝胶电泳常用垂直板电泳装置，即将聚丙烯酰胺凝胶灌装在双层玻璃板之间，在凝胶顶端丄样，然后分别在凝胶的底部和顶端接上正负电极，在凝胶中形成电场，在电场的作用下，蛋白质由凝胶顶端向下移动，移动的速度与蛋白质所带电荷、分子大小和分子形状有关，从而把不同的蛋白质分开。在SDS中，大量的SDS与蛋白质结合，由于SDS带有负电，导致蛋白质带有大量负电荷，掩盖了蛋白质本身所带电荷的差异，在电场作用下，SDS-蛋白质复合物由负极像正极移动，移动速度与蛋白质本身电荷差异无关。这样的SDS